Genová exprese porinů a beta-laktamáz během účinku beta-laktamových antibiotik v závislosti na velikosti inokula u klinických izolátů Klebsiella pneumoniae

Abstract

Genová exprese genů porinů a beta-laktamáz během účinku beta- laktamových antibiotik a efekt inokula u klinických izolátů Klebsiella pneumoniae ABSTRAKT V posledních letech narůstá počet publikací, které se zabývají Klebsiella pneumoniae jako jedním z nejvýznamnějších nozokomiálních patogenů a předmětem studií je především narůstající rezistence k širokému spektru antibiotik. Diplomová práce je zaměřena na expresi genů skupiny AmpC - a to β- laktamázy DHA-1 a jejího negativního regulátoru AmpR a současně i porinů OmpK35 a OmpK36 a na efekt inokula. V práci byly použity již dříve charakterizované kmeny Klebsiella pneumoniae. Plazmidy, které byly získány z těchto kmenů byly transformovány do typově odlišných divokých kmenů Klebsiella pneumoniae a následně byla provedena jejich typizace s pomocí pulzní gelové elektroforézy (PFGE) a multilokusové sekvenační typizace (MLST). Pro sledování genové exprese byla použita metoda RT-PCR s použitím specifických primerů a TaqMan sond. Ve většině vzorků byla exprese závislá na přítomnosti induktoru. Vysoce rezistentní kmeny vykazují různý expresní profil, ale exprese blaDHA-1 zůstává indukovatelná cefoxitinem. Různá regulace exprese byla také pozorována u transformantů. Na základě získaných údajů se domníváme, že dříve popsaný regulační mechanismus genů skupiny AmpC není...

Gene expression of porin and beta-lactamases genes during the beta-lactam antibiotic treatment and effect of inoculum size on Klebsiella pneumoniae clinical isolates ABSTRACT In recent years, Klebsiella pneumoniae has been increasingly reported to be one of the most important nosocomial pathogens, and it is usually resistant to many antibiotics. In this work, we focused on the expression of the AmpC group β- lactamase DHA-1 and its negative regulator AmpR, as well as the porins OmpK35 and OmpK36 and on effect of inoculum. We used well-characterized Klebsiella pneumoniae strains in this study. Plasmids obtained from these strains were also transformed into different wild-type Klebsiella pneumoniae strains, which were typed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and multi-locus sequence typing (MLST). Gene expression analysis was performed by RT-PCR using specific primers and TaqMan probes. In most strains, expression was dependent on the presence of an inducer. The highly resistant strain showed a different expression pattern, but the expression of blaDHA-1 remained inducible by cefoxitin. Different regulation was also observed in the transformants. Based on our data, we suggest that the previously described regulatory pathway for AmpC is not generally suitable, and we propose that there are more...