Regulatory functions of the transmembrane adaptor protein NTAL in activation of mast cells

Abstract

Mast cells originate from hematopoietic pluripotent stem cells present in bone marrow. They do not circulate, but are spread throughout a body and reside in all vascularized tissues. Mast cells as a part of innate immune system are also able to influence adaptive immune system and are effectors in IgE-mediated allergic and inflammatory diseases. Mast cells possess high affinity receptor for IgE (FcεRI). Aggregation of the receptor triggers signaling cascades which lead to the release of preformed and de-novo synthesized effector molecules. Early phases of mast cell activation include tyrosine phosphorylation of numerous substrates and formation of signaling assemblies (also called signalosomes). Important structural components of the signalosomes are transmembrane adaptor proteins. One of them is the transmembrane adaptor protein NTAL (Non-T cell Activation Linker), which becomes rapidly tyrosine- phosphorylated upon FcεRI triggering and serves as a positive or a negative regulator of FcεRI signaling. To be able to study fine topography of NTAL and other plasma membrane components in mouse bone marrow-derived mast cells (BMMCs), we first developed a new method of plasma membrane sheets isolation from non-adherent cells. The method is based on adsorption of the cells to ultraclean glass cover-slips,...

SOUHRN Žírné buňky pocházejí z kmenových buněk kostní dřeně. Tyto buňky necirkulují v krvi, ale nachází se v celé řadě tkání, kde jsou často umístěny v blízkosti cév. Žírné buňky jsou součástí přirozeného imunitního systému, ale zároveň ovlivňují i adaptivní imunitní systém a také se účastní alergických a zánětlivých reakcí. Žírné buňky mají na svém povrchu vysokoafinitní receptor pro IgE (FcεRI). Prokřížení tohoto receptoru spouští kaskádu reakcí, která vede k uvolnění předpřipravených a nově syntetizovaných efektorových molekul. Časné fáze aktivace těchto buněk zahrnují tyrosinovou fosforylaci četných substrátů a formování signálních komplexů (v angl. "signalosomes"). Důležité strukturní prvky těchto komplexů jsou transmembránové adaptorové proteiny. Jedním takovým proteinem je adaptorový protein NTAL (Non-T cell Activation Linker), který je velmi rychle fosforylován na tyrosinových zbytcích po prokřížení FcεRI a který slouží jako pozitivní, ale i negativní regulátor signálních drah FcεRI. Abychom byli schopni studovat podrobnou topografii proteinu NTAL a dalších molekul plazmatické membrány u žírných buněk odvozených z kostní dřeně (BMMC), nejprve jsme vyvinuli novou metodu izolace listů plazmatické membrány neadherentních buněk. Tato metoda je založena na adsorpci buněk k ultračistému mikroskopickému...