Detekce experimentální minimální choroby metodou PCR

Abstract

Název diplomové práce: Detekce experimentální minimální choroby metodou PCR Abstrakt diplomové práce: Úvod: Minimální zbytková choroba představuje přítomnost životaschopných nádorových buněk v organizmu v průběhu nebo po ukončení onkologické léčby. Tyto buňky nelze detekovat obvyklými metodami. Diagnostika je založena na průkazu odlišnosti mezi nádorovými a zdravými buňkami velmi citlivými metodami. V experimentální medicíně je potřeba detekovat lidské buňky v myších tkáních po xenotransplantacích. Proto jsem zavedl citlivou metodu PCR schopnou detekovat minimální množství lidských buněk ve zvířecích tkáních. Materiál: K dispozici jsem měl lidské lymfocyty, neuroblastomovou linii, buněčnou linii odvozenou od Ewingova sarkomu, vzorky tkání nejčastěji používaných laboratorních zvířat - myši, laboratorního potkana, králíka, opice, psa, morčete a mozkové tkáně potkanů z místa vpichu, kam byly dodány lidské CD34+ hematopoetické progenitorové buňky, a tkáně z místa leze. Výsledky: Dilučním testem jsem určil citlivost PCR metody 1:105 . V experimentu s různou zvířecí tkání jsem prokázal, že metoda detekuje pouze přítomnost lidské DNA. Aplikovatelnost metody jsem vyzkoušel v experimentu sledování CD34+ lidských hematopoetických progenitorových buněk v myších mozcích. Dokázal jsem, že CD34+ buňky implantované do...

Title of thesis: Detection of experimental minimal disease using PCR Abstract of thesis: Introduction: Minimal residual disease is a presence of viable tumor cells in the body during or after cancer treatment. These cells can not be detected by usual methods. Diagnosis is based on proof of differences between tumor and healthy cells using very sensitive methods. In experimental medicine, there is a need for detection of human cells in mouse tissues after xenotransplantation. That's why I introduced a sensitive PCR method capable of detecting minimum quantities of human cells in animal tissues. Material: I worked with human lymphocytes, neuroblastoma cell line, cell line derived from Ewing sarcoma, tissue samples from commonly used laboratory animals - mouse, rat, rabbit, monkey, dog, guinea pig and rat brain tissues from the injection site where they were delivered human CD34+ haematopoietic progenitor cells, and tissue from the lesions. Results: I set the sensitivity of PCR method 1:105 using dilution test. In the experiment with various animal's tissue I showed that the method detect only the presence of human DNA. I tried applicability of the method in an experiment of monitoring human CD34+ hematopoietic progenitor cells in mice brains. I proved that CD34+ cells implanted into the brain migrate to the...