Analýza vlivu inhibitorů Src kináz na adhezní signalizaci v lidských hematopoietických buňkách

Abstract

Adheze hematopoietických buněk k mikroprostředí kostní dřeně je důležitým předpokladem jejich správného vývoje. Je prokázáno, že na řízení adhezních signál-ních drah se podílejí kinázy rodiny Src (SFK), ačkoli jejich přesná role v regulaci adhezních signálních kaskád je nejasná. Většina poznatků o buněčné adhezivitě má navíc původ ve studiu adherentních buněčných typů, přičemž jen velmi málo prací se zaměřuje na buňky hematopoietické. Poruchy adhezivity jsou přitom často součástí hematologických onemocnění, jako je chronická myeloidní leukémie (CML). Zvýšená exprese SFK je také jednou z možných příčin vzniku rezistence nemoci vůči léčivu první volby pro pacienty s CML, imatinib mesylátu. Druhá generace léčiv (např. dasatinib) inhibuje kromě proteinu Bcr-Abl i SFK. Vedle toho jsou dostupné i inhibitory relativně specifické pro SFK (PP2, Src inhibitor-1), ale nic není známo o účincích těchto inhibitorů na adhezivitu hematopoietických prekurzorů. Pro sledová-ní dynamiky interakce hematopoietických buněk s proteiny extracelulární matrice jsme zavedli novou metodu využívající systém RTCA xCELLigence DP, pomocí něhož jsme v kombinaci s již déle používanou metodou fluorimetrické detekce frakce adhe-rovaných buněk pozorovali obecně proadhezivní účinky různých látek (dasatinib, imatinib, PP2, Src...

Adhesion of hematopoietic cells to the bone marrow microenvironment is important for their proper development. It is proven that Src-family kinases (SFK) regulate cell adhesion, although their exact role in the regulation of adhesion signaling remains unclear. Since adhesion processes are investigated mainly in adherent cell types, far less is known about hematopoietic cells. However, defects in the cell adhesion accompany a number of hematological diseases, like chronic myeloid leukaemia (CML). SFK overexpression is one of the proposed mechanisms of resistance to the first-line CML treatment, imatinib mesylate. Second generation drugs (e. g. dasatinib) inhibit SFK together with Bcr-Abl. Additionally, SFK-specific inhibitors (PP2, Src inhibitor-1) are also available, but there are no studies about effects of these drugs on cellular adhesivity of hematopoietic precursors. To explore the dynamics of hematopoietic cell adhesion to the extracellular matrix, we introduced a new approach using the RTCA xCELLigence DP system along with the well-established method of fluorimetric detection of adherent cell fraction. Our general observation is that various drugs (dasatinib, imatinib, PP2, Src inhibitor-1) induce pro-adhesive effects in several leukemic cell lines. Direct comparison of the kinetics of...