Stanovení biomasy u hub bílé hniloby v průběhu kultivace pomocí analytických metod

Abstract

Je dobře znám význam hub v půdních ekosystémech, a přesná kvantifikace houbové biomasy je nezbytná pro posouzení jejich role v koloběhu živin, potravním řetězci a půdní agregace. Bakalářská práce se zabývá stanovením obsahu mastných kyselin, volného i vázaného ergosterolu u hub bílé hniloby (L. tigrinus, P. osteratus, I. lacteus, T. versicicolor) na sterilním substrátu slámových pelet během kultivačního období 5, 8, 12, 16 a 20 dnů a následné porovnání těchto metod mezi sebou. V teoretické časti jsou popsány možnosti stanovení mikrobiální biomasy, vlastnosti ergosterolu, lipidů a mastných kyselin. Dále jsou shrnuty instrumentace plynové a kapalinové chromatografie a jejích využití při stanovení fosfolipidů mastných kyselin a ergosterolu v reálných vzorcích. Experimentální část popisuje přípravu methylesterů z lyofilizovaných vzorků hub, použitých pro degradační pokus a stanovení fosfolipidů mastných kyselin metodou GC-MS. Dále je popsaná metoda extrakce volného a celkového ergosterolu a jejich stanoveni pomoci HPLC-UV. Na základě zastoupení mastných kyselin a ergosterolu ve vzorcích hub bylo provedeno porovnání vzorků a byla diskutována možnost využití stanovení biomasy pomocí popsaných metod. Bakalářská práce byla realizována v Mikrobiologickém ústavu Akademií věd ČR v Praze. Klíčová slova: PLFA,...

The role of fungi in the soil ecosystems is well known. Exact determination of the fungal biomass is necessary for the understanding of their role in the cycle of soil nutrients, in the existing food chains of various animal types and in the soil aggregation. Bachelor's thesis is aimed at determination of white rot fungal (L. tigrinus, P. osteratus, I. lacteus, T. versicicolor) phospholipid-fatty acids and ergosterol (free and total) quantitative content with the subsequent comparison of the research results among themselves. Straw pellets were used as a sterile substrate for mushrooms. Their period of cultivation was 5, 8, 12, 16 and 20 days. The theoretical part describes methods for determining the microbial biomass, properties of ergosterol biosynthesis, lipids and fatty acids. Tools of gas and liquid chromatography, their use in determining the phospholipid-fatty acids and ergosterol in real samples are summarized. The experimental part of the procedure describes preparation of methylesters of fungi freeze-dried specimens that had previously been used in a biodegradation experiment. It just describes a method of determining fatty acids by gas chromatography, the extraction of ergosterol (free and total) and its subsequent determination using liquid chromatography. Based on the definition of...