Stanovení porothramycinu pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie

Abstract

Porothramycin je antibiotikum anthramycinové skupiny a je produkován kmenem Streptomyces albus. Porothramycin vykazuje antibakteriální a především protinádorové účinky. Zároveň je však prokazatelně kardiotoxický, a proto zatím nenachází využití v klinické praxi. Některé geny účastnící se syntézy porothramycinu lze použít k přípravě nových netoxických derivátů antibiotik metodou kombinatoriální biosyntézy. Za tímto účelem bylo nezbytné vyvinout novou rutinní chromatografickou metodu pro analýzu porothramycinu pomocí UHPLC-UV-MS techniky. Na základě diskového difuzního testu pomocí citlivého kmene Kocuria rhizophila bylo nejprve vybráno vhodné kultivační médium pro produkci porothramycinu. Z kultivačního média bylo následně izolováno 1,7 mg komerčně nedostupného standardu porothramycinu pro účely vývoje a validace metody stanovení této látky. Současně bylo zjištěno, že kromě porothramycinu jsou do média produkovány také dva analogy porothramycinu. Konečná metoda stanovení porothramycinu se skládala z extrakce na pevné fázi na kolonkách obsahujících styren-divinylbenzenový sorbent s navázanými vinylpyrrolidonovými skupinami. Extrakt byl poté dávkován na UHPLC Acquity BEH C18 kolonu a analyzován v gradientovém módu s mobilními fázemi acetonitril a 0,1% mravenčí kyselina. Porothramycin byl detekován UV...

Porothramycin is the antibiotic of anthramycin group and is produced by Streptomyces albus. Porothramycin is characterized by antibacterial and especially antitumor activity. But it has also been proved to be cardiotoxic; and therefore, it has not been applied in clinical practice yet. However, some genes involved in the synthesis of porothramycin can be used for the preparation of new nontoxic derivatives of antibiotics by means of combinatorial biosynthesis. For this purpose, it was necessary to develop a new routine chromatographic UHPLC-UV- MS method for analysis of porothramycin. A suitable cultivation broth for production of porothramycin was found using disk diffusion test with the sensitive strain Kocuria rhizophila. Then, 1.7 mg of porothramycin standard, which was not available on the market, was isolated from the cultivation broth and used for the development and validation of the method. Also, it was found out that apart from porothramycin, two porothramycin-related compounds were produced into the cultivation broth. In the final method for determination of porothramycin, the solid phase extraction using styren-divinylbenzene sorbent with vinylpyrrolidone functionalities was applied. The extracts were then loaded onto the UHPLC Acquity BEH C18 column and analyzed under gradient mode...