Studium úlohy proteinkinázy C alfa v améboidní invazivitě nádorových buněk

Abstract

2. Abstrakt Proteín kináza C α (PKCα) je serín/threonínová kináza regulujúca veľa rôznych signálnych kaskád v bunke. Cieľom tejto práce bolo preskúmať potenciálnu úlohu PKCα v améboidnej morfológii a invazivite nádorových buniek. Bolo pozorované, že hladina expresie PKCα a takisto hladina jej fosforylácie na Thr497 zostala nezmenená po améboidne-mezenchymálnom prechode A375m2 buniek (indukovanom inhibítorom kinázy ROCK) ako v 3D, tak aj v 2D prostredí. Ukázalo sa však, že aktivácia PKCα jej aktivátorom viedla k mezenchymálne-améboidnému prechodu K2 a MDA-MB-231 mezenchymálnych bunkových línií, hoci celková schopnosť buniek invadovať do 3D kolagénu zostala nezmenená. Treba však poznamenať, že aktivácia PKCα významne znížila schopnosť A375m2 buniek degradovať extracelulárnu matrix. Naopak, inhibícia PKCα jej inhibítorom zapríčinila améboidne-mezenchymálny prechod améboidných buniek A375m2 a tento prechod bol spojený so zníženou invazivitou všetkých použitých bunkových línií. PKCα inhibítor nemal žiadny vplyv na degradovanú plochu A375m2 buniek. V súlade s týmito pozorovaniami, špecifické umlčanie PKCα pomocou siRNA viedlo k zmene morfológie A375m2 buniek z améboidnej na mezenchymálnu a tiež k zníženej schopnosti buniek invadovať do 3D kolagénu. Navyše, schopnosti A375m2 buniek degradovať želatín boli význačne...

1. Abstract Protein kinase C α (PKCα) is a serine/threonine protein kinase regulating many different signaling pathways. The aim of this study was to investigate the potential role of PKCα in amoeboid morphology and invasion of cancer cells. It was observed, that expression of PKCα as well as its phosphorylation on Thr497 remained unchanged upon amoeboid-mesenchymal transition of A375m2 cells (induced by inhibition of ROCK kinase) both in 3D and in 2D environment. However, activation of PKCα by PKC activator treatment resulted in mesenchymal- amoeboid transition of K2 and MDA-MB-231 mesenchymal cell lines, although it did not change overall invasivity ability of cells to invade 3D collagen. Notably, PKCα activation significantly reduced matrix degrading abilities of A375m2 cells. Conversely, inhibition of PKCα by PKCα inhibitor treatment caused amoeboid-mesenchymal transition of amoeboid A375m2 cells and it was associated with decreased invasiveness of all three cell lines used. PKCα inhibitor did not have any effect on gelatin degradation area of A375m2 cells. Consistently, specific siRNA mediated downregulation of PKCα lead to transition from amoeboid to mesenchymal morphology of A375m2 cells and reduced invasiveness of cells into 3D collagen. Moreover, gelatin degrading abilities of A375m2 cells were...