Sulfatované metabolity silybinu a jejich interakce se sulfatasami
Sulphated metabolites of silybin and their interactions with sulphatases
bakalářská práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/39429Identifikátory
SIS: 76851
Kolekce
- Kvalifikační práce [19109]
Autor
Vedoucí práce
Konzultant práce
Bezouška, Karel
Oponent práce
Kavan, Daniel
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Biochemie
Katedra / ústav / klinika
Katedra biochemie
Datum obhajoby
14. 9. 2010
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Čeština
Známka
Velmi dobře
Klíčová slova (česky)
flavonolignany, silybin, silybin-7,23-disulfát, sulfatace, sulfatasy, sulfatasa z Helix pomatiaKlíčová slova (anglicky)
flavonolignans, silybin, silybin-7,23-disulfate, sulphation, sulphatases, sulphatase from Helix pomatiaBakalářská práce řeší problematiku syntetických sulfatovaných metabolitů silybinu při jejich interakcích se sulfatasami. Silybin je flavonolignan izolovaný ze semen ostropestřce mariánského (Silybum marianum). Sulfáty silybinu (metabolity) nebyly z organismu dosud izolovány a jejich struktura nebyla tudíž přesně určena. V této práci je uveden postup přípravy silybin-7,23-disulfátu, který byl syntetizován z přírodního silybinu. Disulfát silybinu byl izolován a spektrálně charakterizován (NMR, MS). Dále byly změřeny kinetické parametry reakce pNPS se sulfatasou z Helix pomatia: Km = 0,0494 mmol/l a Vmax = 0,0325 mmol/dm3 /min. Podmínky pro práci se sulfatasou z Helix pomatia byly zvoleny v souladu s literaturou. Jedním z hlavních cílů této práce bylo zjistit zda silybin-7,23-disulfát je substrátem či inhibitorem sulfatasy z Helix pomatia. Měřením aktivity sulfatasy z Helix pomatia v přítomnosti různých koncentrací silybin-7,23-disulfátu bylo zjištěno, že disulfát silybinu při koncentraci vyšší než 0,2 mM je silným inhibitorem testované sulfatasy. Dále bylo provedeno několik reakcí kde silybin-7,23-disulfát byl použit ve vhodné koncentraci jako potenciální substrát pro sulfatasu z Helix pomatia. Reakce byly monitorovány metodou HPLC a bylo prokázáno, že sulfatasa z Helix pomatia štěpí...
This bachelor thesis solves the question of sulphated metabolites of silybin by their interactions with sulfatases. Silybin is flavonolignan prepared from the seeds of milk thistle (Silybum marianum). Sulfate of silybin (metabolite) has not been isolated from organism so far thus its exact structure has not been determined. In this work synthesis of silybin-7,23-disulfate from natural silybin is presented. Silybin disulfate was isolated and spectrally characterized (NMR, MS). In the next step the kinetics of the reaction pNPS with sulfatase from Helix pomatia was measured: Km = 0.0494 mmol/l a Vmax = 0.0325 mmol/dm3 /min. Conditions for sulfatase reaction from Helix pomatia were selected according to literature. One of the main goal was to determine, whether silybin-7,23-disulfate is a substrate and/or an inhibitor of sulfatase from Helix pomatia. Activity measurements of the sulfatase from Helix pomatia in the presence of various concentrations of silybin-7,23-disulfate enabled us to determine that silybin disulfate at concentration higher than 0.2 mM is a strong inhibitor of the sulfatase tested. Series of reactions with sulfatase from Helix pomatia were performed to determine whether silybin-7,23-disulfate is a substrate. Reactions were monitored by HPLC and it was demonstrated that the...