Fluorescenční spektroskopie suspenzí kvasinek barvených calcofluorem.

Abstract

Název práce: Fluorescenční spektroskopie suspenzí kvasinek barvených calcofluorem Autor: Marek Dostál Ústav: Fyzikální ústav UK Vedoucí bakalářské práce: prof. RNDr. Jaromír Plášek CSc. Abstrakt: V této práci jsme hledali a nalezli jednoduchou a rychlou metodu, která využívá fluorescenční spektroskopii ke zkoumání a porovnávání kvality buněčných stěn různých rodů kvasinek, pěstovaných při vysoké a nízké koncentraci glukózy v růstovém médiu a měřených v rozpouštědlech o různých iontových silách. Na kvalitu buněčné stěny kvasinek má největší vliv právě růstové médium. Jako fluorescenční barvivo jsme použili calcofluor, který při excitaci UV zářením λex≈365nm modře fluoreskuje s maximem v okolí λem≈420nm v závislosti na jeho koncentraci v suspenzi. Při zkoumání spekter calcofluoru jsme se museli vyvarovat vnitřnímu filtru suspenze, který může značnou mírou ovlivňovat výsledky měření. Podařilo se nám potvrdit platnost podílové metody jakožto ukazatele umožňující pomocí podílových spekter charakterizovat odlišnou strukturu buněčné stěny u různých kmenů kvasinek (spectral fingerprint). Klíčová slova: Fluorescence, spektroskopie, buněčná stěna, calcofluor, vnitřní filtr.

Title: Fluorescence spectroscopy of calcofluor stained yeast cell suspensions Author: Marek Dostál Department: Fyzikální ústav UK Supervisor: prof. RNDr. Jaromír Plášek CSc. Abstract: We were finding and we found fast and easy fluorescence spectroscopy method which we can use for cell wall research of different yeast types that were cultivated on various medium. Gauging was under way in solution of different ionic forces. The growth medium has the greatest effect on quality of cell wall. We use calcofluor as fluorescent colour. After exposing calcofluor by UV (λex ≈ 365 nm) calcofluor emites blue fluorescence with maximum intensity around 420 nm in dependence on suspension concentration. We must be careful about inner filter that can influence our result during research. We validated diversity of cell wall structures in various yeast types by ratio spectral method (spectral fingerprint). Keywords: Fluorescence, spectroscopy, cell wall, calcofluor, inner filter.