NKR-P1C receptor-carbohydrate interaction contributes to antitumor immune response via activation of NK and B cells

Abstract

SOUHRN Lektin-sacharidové interakce a receptory v nich zapojené jsou v současné době intenzivně studovány pro svou významnou úlohu nejen v infekční, ale také protinádorové imunitě. Hlavními buněčnými typy, které se podílejí na rozpoznávání sacharidových epitopů, jsou NK, NKT a B buňky. Diferenciace B lymfocytů může být zprostředkována aktivovanými NK buňkami buď přímým mezibuněčným kontaktem, anebo produkcí IFN-γ. Náš výzkum se věnuje studiu NK buněčných receptorů z rodiny C-typu lektinů, které specificky rozpoznávají sacharidové oblasti glykoproteinů. Syntetické glykokonjugáty s terminálními N-acetyl-D-glukosaminy na polyamidoaminovém (GN8P) a calix[4]arenovém (GN4C) nosiči, které byly zde použity, vykazovaly nejvyšší afinitu k aktivačním izoformám NKR-P1 (A a C) receptorů. Předmětem předkládané disertační práce je objasnění funkce NKR-P1C receptoru v rozpoznávání sacharidů a divergence Nkr-p1c genu mezi C57BL/6 (NK1.1+, NKR-P1CB6) a BALB/c (NK1.1-, NKR- P1CBALB/c) kmeny myší. Aktivace NK buněk a následně vyvolaná B lymfocytární diferenciace a výkonná funkce byly sledovány za použití glykokonjugátů GN8P a GN4C jako prototypových ligandů. Výsledky ukázaly, že GN8P zvýšil expresi mRNA pro NKR-P1C receptor, syntézu IFN- γ a lytickou aktivitu NK buněk, tvorbu antigen specifických (anti-KLH, anti- DNP a...

Lectin - saccharide interactions and the involved receptors are currently intensively studied for their important role in antimicrobial as well as antitumor immunity. The major cell types participating in carbohydrate recognition are NK, NKT, and B cells. The differentiation of B lymphocytes could be induced by activated NK cells via direct intercellular contact and/or IFN-γ release. Our research is focused on NK cell receptors of C-type lectin-like family recognizing carbohydrate epitopes of glycoproteins. Synthetic glycoconjugates with terminal N- acetyl-D-glucosamines on polyamidoamine (GN8P) or calix[4]arene (GN4C) scaffold used in this study, exerted the highest binding affinity to activating isoforms of rodent NKR-P1 (A and C) receptor. The aim of the presented dissertation thesis was to elucidate, how Nkr-p1c gene divergence, between C57BL/6 (NK1.1-positive, NKR- P1CB6) and BALB/c (NK1.1-negative, NKR-P1CBALB/c) mouse strains, could affect NK cell activation and subsequent triggering of B lymphocyte effector functions using GN8P and GN4C as NKR-P1C prototype ligands. We demonstrated, that GN8P increased mRNA expression for NKR-P1C receptor, IFN-γ synthesis and lytic activity of NK cells, antigen-specific (anti-KLH, anti-DNP, and anti-B16F10) IgG (particularly IgG2a) formation, number of...