Studium vlivu 17β-estradiolu a 17α-ethynylestradiolu na kapacitaci myších spermií in vitro.

Abstract

Mezi polutanty vyskytující se v životním prostředí patří také látky nazývající se endokrinní disruptory (EDC). Ty působí změny ve funkci endokrinních orgánů a mimo jiné mezi ně patří i estrogenní hormony, a to jak přirozené, tak syntetické. EDC se mohou vázat na receptory endogenních hormonů nebo bránit jejich syntéze. 17β-Estradiol je přirozený estrogenní hormon patřící do skupiny endokrinních disruptorů, ve větší míře jej vylučují ženy, avšak u mužů je produkován také. Mezi EDC patří také syntetický estrogen 17α-ethynylestradiol, který je hlavní složkou hormonální antikoncepce a spolu s ostatními estrogenními endokrinními disruptory je nejspíš zodpovědný za feminizaci samců u živočichů žijících v blízkosti čistíren odpadních vod. Účelem této práce bylo vyvinout metodu pro stanovení koncentrace volného 17β-estradiolu (BE2) a 17α-ethynylestradiolu (EE2) dostupného pro kapacitující spermie. Pro stanovení BE2 během kapacitace myších spermií in vitro bylo použito vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) s tandemovou hmotnostní detekcí (MS/MS). Separační systém v reverzním módu se sestával z kolony SunFire C18 a jednoduché binární mobilní fáze složené z ACN a vody v poměru 40/60 (v/v), obě složky mobilní fáze obsahovaly 0,1% roztok mravenčí kyseliny. Za optimalizovaných separačních a kvantifikačních...

Environmental estrogens (natural and synthetic) belong to a group of contaminants called endocrine disrupting chemicals (EDCs). These compounds interfere with a function of endocrine system. They can bind to natural estrogen receptors or block synthesis of endogenous hormones. 17β-Estradiol (BE2) is a natural endocrine disruptor produced more by women than men. Also a synthetic 17α-ethynylestradiol (EE2) belongs to EDCs. It is used as a main part of birth control pills. Together with other endocrine disruptors EE2 is probably responsible for feminization of male animals living in effluents of waste water treatment plants. The aim of this thesis was to develop a method for determining free 17β-estradiol and 17α-ethynylestradiol available to capacitating sperm. In order to determine a status of BE2 during mouse sperm capacitation in vitro, a high performance liquid chromatography (HPLC) method with tandem mass spectrometry (MS/MS) detection was used. A reversed-phase separation mode using a SunFire C18 column with a simple mobile phase composed of acetonitrile and water at the ratio 40/60 (v/v) containing 0,1% formic acid in both components was applied. Under the optimized separation conditions, calibration curves for 17β-estradiol and 17α-ethynylestradiol were measured in the concentration range of 1-250...