Slepičí protilátky jako prostředek pasivní imunizace proti mikrobiálním onemocněním dýchacího traktu

Abstract

Bakterie Pseudomonas aeruginosa a Burkholderia cepacia jsou oportunní lidské patogeny. Nebezpečí představují pro imunokompromitované skupiny pacientů, z nichž nejvýznamnější jsou pacienti trpící cystickou fibrosou, pro něž jsou infekce vyvolané bakteriemi Pseudomonas aeruginosa, případně Burkholderia cepacia, často letální. Tyto bakterie vykazují rezistenci vůči většině používaných antibiotik a imunizace pacientů paradoxně zhoršuje stav pacientů. Jako perspektivní nástroj jejich orchrany se jeví pasivní imunizace slepičími protilátkami. Slepičí protilátky, na rozdíl od savčích, neaktivují komplementovou kaskádu a nezpůsobují tak zánětlivou reakci V této práci byly připraveny specifické slepičí protilátky proti významnému virulenčnímu faktoru - bakteriálním lektinům PAIIL a BClA zodpovědným za adhezi. Specifita těchto protilátek byla prokázána metodami ELISA a Western blot. Následně byly protilátky afinitně purifikovány a štěpeny na fragmety. Připravené protilátky specificky rozeznávaly bakteriální lektiny na povrchu bakterií. Byly izolovány a kultivovány pneumocyty typu II z plic pacientů s cystickou fibrosou. Na nich byly provedeny metodou ELISA testy adheze bakterií na buňky. Jako alternativní model byly použita buňky potkanů a nádorová linie A549. Byla prokázána schopnost protilátek snižovat...

Pseudomonas aeruginosa and Burkholderia cepacia are opportunistic human pathogens. Hazards pose to immunocompromited patient groups, most of whom are patients suffering from cystic fibrosis, for which is the infection caused by Pseudomonas aeruginosa or Burkholderia cepacia, often lethal. Bacteria exhibit resistance to most antibiotics and the immunization of patients, paradoxically, worsens the patients' condition. Hen antibodies, unlike mammalian do not activate the complement cascade and do not cause the inflammatory response, therefore, seem to be a suitable tool to protect high risk populations as a means of passive immunization. In this work were prepared specific chicken antibodies against significant virulent factor - bacterial lectins PAIIL and BClA responsible for adhesion. Antibody specificity was demonstrated by ELISA and Western blot. Antibodies were affinity purified and cleaved to fragments. Pneumocytes type II from the lungs of patients with Cystic Fibrosis were isolated and cultured. Tests of the adhesion of bacteria cells were performed on them using ELISA. As an alternative model rat pneumocytes and tumor cell line A549 has been used. Prepared antibodies specifically detect bacterial lectins on the surface of bacteria. Antibody has been shown to reduce adhesion of bacteria to...