Kmenové buňky zubní pulpy

Abstract

Tématem této disertační práce je optimalizace vybavení zubní pulpy z cavum pulpae, izolace kmenových buněk zubní pulpy stálé dentice (KBZP) a standardizace kultivačních podmínek pro jejich dlouhodobou kultivaci. Postupy vyhodnocené jako optimální na liniích KBZP byly dále použity pro izolaci a kultivaci kmenových buněk zubní pulpy dočasné dentice (SHED). Dalším cílem bylo charakterizovat KBZP/SHED a ověřit schopnost těchto buněk diferencovat se v jiné buněčné linie (osteogenní, chondrogenní, adipogenní). Porovnávali jsme postupy extrakce zubní pulpy a metody izolace KBZP. Ke kultivačním experimentům byla použita tři média s rozdílným množstvím fetálního telecího séra (FCS) ve snaze optimalizovat nejnižší hladinu tohoto xenogenního suplementu v médiu při zachování běžné proliferační aktivity a cytogenetické stability KBZP. Standardizované postupy a vybrané kultivační médiu byly použity také při izolaci a kultivaci kmenových buněk zubní pulpy z dočasných zubů (SHED). KBZP a SHED jsme charakterizovali pomocí základních biologických vlastností (morfologie, viabilita, velikost buněk, proliferační aktivita). Byl studován vliv jednotlivých médií na biologické vlastnosti (viz výše), fenotyp a stabilitu karyotypu KBZP po dosažení Hayflickova limitu. Optimálním postupem extrakce zubní pulpy se ukázala být...

The aim of this dissertation study was to optimize the isolation and long term cultivation protocols for human dental pulp stem cells. The protocols which showed best results were used for cultivation of dental pulp stem cell isolated from exfoliated teeth (SHED). Additional aims were to characterize DPSC and SHED and prove their ability to proliferate over Hayflick's limit and differentiate into mature cell lines (osteoblasts, chondroblasts and adipocytes). In order to find optimal protocols for isolation of dental pulp from tooth, we tried three different approaches. During optimization of cultivation protocol we focused on decreasing amount of fetal calf serum (FCS) from 10 % FCS in cultivation media (most often used in literature) into 2 % and thus get closer to cultivation conditions suitable for clinical usage. We compared DPSC cultivated in three different media (medium with 10 % FCS, 2 % FCS supplemented with growth factors and media with 2 % FCS supplemented with ITS and growth factors). For characterization of DPSC and SHED we used basic biological properties (proliferation activity, viability, morphology), their phenotype and karyotype. The study demonstrated that the best protocol for isolation of dental pulp from tooth was to break the roots and extract the pulp throw this aperture. We...