Sestřih intronu TUB3i v buňkách mutantních v genu PRP45

Abstract

Protein Prp45 kvasinek Saccharomyces cerevisiae představuje esenciální faktor podílející se na sestřihu pre-mRNA. Již dříve byla v naší laboratoři připravena zkrácená verze genu PRP45, prp45(1-169), vykazující termosensitivní fenotyp. Tato práce se pokouší přispět k lepší charakterizaci této mutanty. Testovali jsem citlivost buněk prp45(1-169) k inhibitoru polymerace mikrotubulů benomylu a následně jsme zjistili, že nadprodukce Tub3 z plasmidu nalezenou citlivost mutant prp45(1-169) k benomylu potlačuje. Dále jsem se zabývali vlivem delece intronů z genů TUB1, TUB3 a COF1 na citlivost buněk prp45(1-169) ke zvýšené teplotě. Pomocí metody RT-qPCR jsme zjistili, že v důsledku mutace prp45(1-169) dochází k výraznému zvýšení hladiny pre-mRNA všech sledovaných genů což by mohlo znamenat, že sestřih v těchto buňkách je poškozen již před první transesterifikační reakcí.

Protein Prp45, an essential factor of the yeast Saccharomyces cerevisiae, is implicated in pre-mRNA splicing. A truncated version of the PRP45 gene, prp45(1-169), which exhibits a temperature sensitivity, was previously prepared in our laboratory. The aim of this work is to contribute to better understanding of prp45(1-169) mutant phenotype. We tested the prp45(1-169) strain for its response to microtubule inhibitor benomyl and then we found that TUB3 overexpression from plasmid rescues discovered prp45(1-169) mutant cells hypersensitivity to benomyl. In addition, we studied the influence of TUB1, TUB3, and COF1 intron deletion on prp45(1-169) strain temperature sensitivity. Using RT-qPCR method we found that prp45(1-169) mutation results in the distinctive increase of pre-mRNA level for all tested genes, that could implicate that pre-mRNA splicing in these cells is affected before first transesterication.