Sestřih intronu TUB3i v buňkách mutantních v genu PRP45
The TUB3 intron splicing in PRP45 mutant cells
diplomová práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/31391Identifikátory
SIS: 66426
Kolekce
- Kvalifikační práce [19614]
Autor
Vedoucí práce
Oponent práce
Zimmermannová, Olga
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Buněčná a vývojová biologie
Katedra / ústav / klinika
Katedra buněčné biologie
Datum obhajoby
21. 9. 2010
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Čeština
Známka
Velmi dobře
Protein Prp45 kvasinek Saccharomyces cerevisiae představuje esenciální faktor podílející se na sestřihu pre-mRNA. Již dříve byla v naší laboratoři připravena zkrácená verze genu PRP45, prp45(1-169), vykazující termosensitivní fenotyp. Tato práce se pokouší přispět k lepší charakterizaci této mutanty. Testovali jsem citlivost buněk prp45(1-169) k inhibitoru polymerace mikrotubulů benomylu a následně jsme zjistili, že nadprodukce Tub3 z plasmidu nalezenou citlivost mutant prp45(1-169) k benomylu potlačuje. Dále jsem se zabývali vlivem delece intronů z genů TUB1, TUB3 a COF1 na citlivost buněk prp45(1-169) ke zvýšené teplotě. Pomocí metody RT-qPCR jsme zjistili, že v důsledku mutace prp45(1-169) dochází k výraznému zvýšení hladiny pre-mRNA všech sledovaných genů což by mohlo znamenat, že sestřih v těchto buňkách je poškozen již před první transesterifikační reakcí.
Protein Prp45, an essential factor of the yeast Saccharomyces cerevisiae, is implicated in pre-mRNA splicing. A truncated version of the PRP45 gene, prp45(1-169), which exhibits a temperature sensitivity, was previously prepared in our laboratory. The aim of this work is to contribute to better understanding of prp45(1-169) mutant phenotype. We tested the prp45(1-169) strain for its response to microtubule inhibitor benomyl and then we found that TUB3 overexpression from plasmid rescues discovered prp45(1-169) mutant cells hypersensitivity to benomyl. In addition, we studied the influence of TUB1, TUB3, and COF1 intron deletion on prp45(1-169) strain temperature sensitivity. Using RT-qPCR method we found that prp45(1-169) mutation results in the distinctive increase of pre-mRNA level for all tested genes, that could implicate that pre-mRNA splicing in these cells is affected before first transesterication.