Izolace a charakterizace proteinů oviduktu podílejících se na tvorbě oviduktálního rezervoáru spermií u skotu

Abstract

Tvorba oviduktálního rezervoáru spermií hraje důležitou roli v procesu fertilizace savčího vajíčka. Izolace a charakterizace některých komponent hovězího oviduktu účastnících se interakce spermií s povrchovými složkami oviduktu byla předmětem této studie. Byly připraveny dva afinitní nosiče obsahující imobilizované proteinové složky býčí semenné plasmy: jednak neseparované proteiny býčí semenné plasmy a jednak frakci fosforylcholin vázajících proteinů z býčí semenné plasmy. Tyto afinitní matrice pak byly použity pro studium interakcí imobilizovaných ligandů se složkami oviduktálních epithelů. Byly izolovány dva preparáty oviduktálních membránových proteinů oblasti isthmu: celkové membránové proteiny a apikální frakce membránových proteinů. Tyto membránové preparáty byly separovány pomocí afinitní chromatografie s použitím připravených afinitních nosičů. Afinitní chromatografie ani v jednom případě neposkytla dostatečné množství membránových složek interagujících s afinitními nosiči pro další studie. Dále byla pozornost věnována identifikaci čtyř proteinových zón detekovaných po elektroforetické separaci v přítomnosti SDS (relativní molekulová hmotnost 15 500 - 18 500) ve frakci apikálních membránových proteinů Tyto proteiny byly identifikován po elektroforetické separaci a tryptickém štěpení pomocí...

The oviduct plays an important role in the complex process of fertilization and in the early phase of embryo development. Isolation and characterization of some components of bovine oviduct participating in the formation of oviductal sperm reservoir was a subject of the present study. Two affinity sorbents containing immobilized components of bull seminal plasma (non-separated proteins of bull seminal plasma and their phosphorylcholine binding fraction) were prepared and used for the study of interaction of immobilized ligands with components of oviductal epithelium. Two types of preparation of oviductal membrane proteins of the isthmus region were isolated: complete membrane proteins and the apical fraction of membrane proteins. These preparations were separated using prepared affinity matrices. in both cases only an insignificant amount of proteins was found in the adsorbed fractions. Further attention has been paid to the identification of four protein zones detected after electrophoretic separation in the presence of SDS (rel. mol. wt. 15 500 - 18 500) in the fraction of apical membrane proteins. These proteins were identified after the electrophoretic separation and tryptic digestion using MS analysis as bovine histones H4, H2A typ 2-C, H2B typ 1-K a H3.3. Proteins identified as bovine...