Příprava a testování kapilární náplňové kolony sephadex G-10

Abstract

Sephadex je v biochemických experimentech hojně využívaným sorbentem k separacím molekul v širokém rozmezí molekulových hmotností. Využívá se také k purifikacím nebo odsolování izolovaných proteinů. Dosud byly chromatografické aplikace na tomto principu prováděny jen v kolonách velkých rozměrů, čemuž musela předcházet účinná izolace proteinů, aby bylo na kolonu naneseno dostatečné množství vzorku. Naplnění sephadexu do mikrokolony by snížilo potřebné množství vzorku a mohly by tak být dále zpracovávány obtížně izolovatelné proteiny, které se získávají v malém množství. V této bakalářské práci je s použitím suspenzního plnění mikrokolona opravdu naplněna. K vytvoření gelu jako takového je použito principu přípravy monolitických kolon, tedy naplnění a následné polymerizace, v našem případě hydratace a zgelovatěním.

Sephadex is a common sorbent in biochemistry for separation of molecules of a wide range of molecular masses. Sephadex is also used for purification or desalination of isolated proteins. Up to now, the gel chromatography has been performed in wide separation columns. Therefore, the isolation techniques for proteins had to be very effective to isolate enough proteins as a sufficient amount of the sample. The preparation and application of a capillary separation column packed with sephadex could decrease the needed sample amount and enable work with hardly isolable proteins obtained only in small quantities. In this bachelor project, the capillary column was packed with sephadex using the slurry packing procedure. The principle of monolithic columns was used to create a gel in the column. The column was packed in organic solvent firs, and then hydrated when flushing with water to generate the gel.