Quantitative binding of different analogues of vancomycine to D-Ala-D-Ala using surface plasmon resonance

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Titul, jméno, příjmení kandidáta: Ivana Černá Titul, jméno, příjmení školitele: Drª María José Hernáiz Gómez-Dégano Doc. Ing. Barbora Szotáková, PhD. Název diplomové práce: Kvantitativní vazba různých analogů vankomycinu na D-Ala-D-Ala za použití povrchové plasmonové resonance Tato diplomová práce pojednává o interakcích glykopeptidových antibiotik: teicoplaninu; MDL 63,246; mideplaninu; BI 397 (dalbavancin); A 40926 a vancomycinu s dipeptidem D-Ala-D-Ala. Pro tato antibiotika byly stanoveny a optimalizovány podmínky HPLC analýzy. Pro výzkum vazby uvedených antibiotik na bakteriální stěnu byly připravovány a zkoušeny samotvořící vrstvy (SAM) různých vlastností a různé délky řetězce, prezentující D-Ala-D-Ala. Výsledky dokazují, že nejvhodnější způsob přípravy SAM je inkubace čipu přes noc v etanolovém roztoku alkanthiolu. Nejvhodnější pro studium interakce antibiotikum - D-Ala-D-Ala je SAM tvořena osmiuhlíkovým řetězcem a s několika polyethylenglykolovými skupinami na druhé straně, zakončené karboxylovou skupinou. Na tomto povrchu jsme provedli měření interakcí. Všechny zkoumané glykopeptidy mají k povrchu vyšší afinitu než vankomycin, zvláště BI 397 - dalbavancin.

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Ivana Černá Consultant: Drª María José Hernáiz Gómez-Dégano Doc. Ing. Barbora Szotáková, PhD. Title: Quantitative binding of different analogues of vancomycine to D-Ala-D-Ala using surface plasmon resonance This diploma thesis discusses the interaction studies of different glycopeptide antibiotics: teicoplanin; MDL 63,246; mideplanin; BI 397 (dalbavancin); A 40926 and vancomycin with D-Ala-D-Ala dipeptide. Firstly, the HPLC analysis conditions for these antibiotics were defined and optimized in order to probe their purity. Then, the interaction studies were carried out, for that various self-assembled monolayers (SAM) were prepared based on different hydrophobicity and length of the chain. These SAMs were functionalized with the dipeptide D-Ala-D-Ala for the study of the binding with the antibiotics. The results suggest that the best way to prepare the SAM is incubation of the chip overnight in the ethanol solution of alcanothiol chain. The most applicable SAM for the study of interaction of antibiotic to D-Ala-D-Ala is formed by alcanothiol chain with a carbon chain of 8 carbons and a tetraethylene glycol chain ending in a carboxylic group. Over this surface we performed the study of...