Biofilmy mikrobiálních patogenů Candida albicans a Pseudomonas aeruginosa

Abstract

Bakalářská práce se věnuje studiu interakce kvasinky Candida albicans a bakterie Pseudomonas aeruginosa. Hlavním cílem práce bylo posoudit, jak absence genů HAP43, HAP5, zodpovědných za metabolismus železa, genu RHB1 nebo genu CDR1 pro efluxní pumpu ovlivní kvasinku v přítomnosti bakterie. Aby bylo možné určit vztah kvasinky a bakterie v biofilmu, byla potřeba nejdříve porovnat tvorbu biofilmů mutantních kmenů kvasinky vůči kvasince divokého typu. V experimentální části byla prováděna kvantifikace biofilmu kvasinkových monokultur. Paralelně s kvantifikací byla izolována DNA biofilmů, které vyrostly na definovaném polymeru. Izolace DNA je přípravným krokem pro stanovení zastoupení jednotlivých mikroorganismů metodou qPCR. Ze získaných výsledků bylo možné porovnat kvasinkové kmeny podle množství vytvořeného biofilmu. V práci byla porovnávána tvorba biofilmu jednotlivých monokultur kvasinek mezi sebou a současně byla provedena i kvantifikace biofilmu u směsných kultur. Práce přispěla k objasnění rozdílů v tvorbě biofilmu u kvasinkových monokultur a v přítomnosti bakterie a formuluje hypotézy pro navazující studie. Klíčová slova: Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, biofilm, kvantifikace biofilmu

This bachelor thesis studies the interaction between the yeast Candida albicans and the bacterium Pseudomonas aeruginosa. The main aim of this work was to evaluate how the absence of genes HAP43, HAP5, responsible for iron metabolism, gene RHB1 or gene CDR1 for efflux pump affects the yeast in the presence of the bacterium. To clarify the relationship between yeast and bacteria in biofilm, biofilm formation of the mutant yeast strains had to be initially evaluated against the wild-type yeast. In the experimental part, yeast monoculture biofilm was quantified. In parallel with the quantification, DNA was isolated from biofilms that were formed on a defined polymer. DNA isolation was a preparatory step for determination of the representation of individual microorganism by the method qPCR. From the obtained results, it was possible to compare yeast strains according to the amount of biofilm formed. The work compared biofilm formation among the individual yeast monocultures and simultaneously quantified biofilm formation in mixed cultures. This thesis contributed to the clarification of differences in biofilm formation in yeast monocultures and in the presence of bacteria and formulates hypotheses for follow-up studies. Keywords: Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, biofilm, biofilm quantification