The role of calcium and 14-3-3 in the regulation of human ubiquitin ligase Nedd4-2
Úloha vápníku a proteinu 14-3-3 v regulaci lidské ubikvitin ligasy Nedd4-2
dizertační práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/209661Identifikátory
SIS: 252277
Kolekce
- Kvalifikační práce [5012]
Konzultant práce
Obšil, Tomáš
Fakulta / součást
1. lékařská fakulta
Obor
Biochemie a patobiochemie
Katedra / ústav / klinika
2. lékařská fakulta UK
Datum obhajoby
8. 6. 2026
Nakladatel
Univerzita Karlova, 1. lékařská fakultaJazyk
Angličtina
Známka
Prospěl/a
Klíčová slova (česky)
ubikvitinační kaskáda, rodina HECT, podrodina Nedd4, ubikvitin ligáza Nedd4-2, rodina 14-3-3, izoforma 14-3-3η, strukturní biologie, biochemie, purifikace proteinů, příprava liposomů, fluorescenční značení, kryoelektronová mikroskopie, maloúhlový rozptyl rentgenového záření, vodíko-deuteriovou výměnu ve spojení s hmotnostní spektrometrií, analýza hydrofobity, ubikvitinační eseji, testy vazby na liposomy, autoinhibice, fosforylací řízená interakce, vápenaté ionty, interakce protein-membránaKlíčová slova (anglicky)
ubiquitination cascade, HECT family, Nedd4 subfamily, Nedd4-2 ubiquitin ligase, 14-3-3 family, 14-3-3η isoform, structural biology, biochemistry, protein purification, liposome preparation, fluorescent labelling, cryo-electron microscopy, small-angle X-ray scattering, hydrogen-deuterium exchange coupled to mass spectrometry, hydrophobicity analysis, ubiquitination assays, liposome-binding assays, autoinhibition, phosphorylation-dependent binding, calcium ions, protein-membrane interactionsNedd4-2 (neuronal precursor cell-exprimed developmentally down-regulated 4-like) ubikvitin ligáza je členem podrodiny Nedd4 HECT E3. Je všudypřítomně exprimována a reguluje řadu cílů, primárně integrální membránové proteiny, čímž moduluje různé signální dráhy a přispívá k rozvoji patologických stavů (např. hypertenze, onemocnění ledvin, cystická fibróza, epilepsie a kardiomyopatie). Nedd4-2 podléhá regulaci prostřednictvím celé škály mechanismů; tato práce se zaměřuje na čtyři klíčové režimy: 1) autoinhibici zprostředkovanou intramolekulární vazbou; 2) vápníkem závislou aktivaci; 3) interakce s membránou; a 4) inhibici závislou na fosforylaci zprostředkovanou homodimerem 14-3-3η, rigidním scaffoldovým proteinem. Experimentální práce kombinovala funkční testy (vazba na lipozomy a ubikvitinační eseje), biofyzikální techniky (diferenciální skenovací fluorimetrii, spektroskopii cirkulárního dichroismu, víceúhlový dynamický rozptyl světla, a analytickou ultracentrifugaci) a strukturní charakterizaci (kryoelektronovou mikroskopii, maloúhlový rozptyl rentgenového záření, a vodíko-deuteriovou výměnu ve spojení s hmotnostní spektrometrií). Výsledky poskytují vhled do regulačních mechanismů Nedd4-2 a mohou být aplikovány při vývoji farmakologických strategií zaměřených na onemocnění spojená s Nedd4-2.