Hodnocení stresových indikátorů a vývojové kompetence oocytů po vitálním barvení

Abstract

Oocyte quality represents one of the key factors influencing the success of assisted reproduction, while its accurate and objective evaluation remains a challenge. Traditional methods based on morphological assessment are to some extent subjective, and therefore increasing emphasis is placed on the identification of novel markers enabling more reliable selection of developmentally competent oocytes. The aim of this thesis was to evaluate the effect of vital staining with Lissamine Green B on the quality of porcine oocytes, their ability to undergo in vitro maturation, and subsequent embryonic development following parthenogenetic activation. At the same time, the relationship between plasma membrane integrity and selected cellular and molecular parameters, including mitochondrial distribution, redox balance, and gene expression, was analyzed. In the experimental part, porcine oocytes were divided into three groups: control, LB negative (LB−), and LB positive (LB+). In these groups, the maturation rate, embryonic development after parthenogenetic activation, and selected indicators of oocyte quality were evaluated, including glutathione levels, oxidative stress, mitochondrial distribution, and the expression of selected genes. The results showed that LB− oocytes exhibited a higher in vitro...

Kvalita oocytů představuje jeden z klíčových faktorů ovlivňujících úspěšnost asistované reprodukce, přičemž její přesné a objektivní hodnocení zůstává i nadále výzvou. Tradiční metody založené na morfologickém posouzení jsou do určité míry subjektivní, a proto je stále větší důraz kladen na hledání nových markerů umožňujících spolehlivější selekci vývojově kompetentních oocytů. Cílem této práce bylo zhodnotit vliv vitálního barviva Lissamine Green B na kvalitu prasečích oocytů, jejich schopnost in vitro maturace a následný embryonální vývoj po partenogenetické aktivaci. Současně byla analyzována souvislost mezi integritou buněčné membrány a vybranými buněčnými a molekulárními parametry, včetně mitochondriální distribuce, redoxní rovnováhy a genové exprese. V experimentální části byly prasečí oocyty rozděleny do tří skupin: kontrolní, LB negativní (LB-) a LB pozitivní (LB+). U těchto skupin byla hodnocena úspěšnost maturace, schopnost embryonálního vývoje po partenogenetické aktivaci a vybrané ukazatele buněčné kvality, včetně hladiny glutathionu, oxidačního stresu, mitochondriální distribuce a exprese vybraných genů. Výsledky ukázaly, že oocyty skupiny LB- vykazují vyšší úspěšnost in vitro maturace, tedy vyšší podíl oocytů dosahujících stádia metafáze II (MII), a zároveň vyšší podíl blastocyst ve...