Příprava domén receptoru Siglec-7 a studium jeho dimerizace

Abstract

5 Abstract Siglec-7 is a transmembrane receptor primarily expressed on the surface of NK cells, where it participates in the inhibition of the immune response through binding to sialic acid-containing ligands. The extracellular domain of this receptor consists of a V-type immunoglobulin domain, which is responsible for sialic acid recognition, and two C2-type domains. The structure of the V-type domain has been resolved using X-ray crystallography; however, the structure of the entire extracellular domain has not yet been determined. Recent findings suggest that it forms a non-covalent homodimer. In this work, recombinant production of five truncated constructs of the Siglec-7 extracellular domain was performed in the HEK293S GnTI- cell line, which was followed by their characterization and structural analysis with the aim to determine the domains responsible for the dimerization of this receptor. Results obtained by analytical ultracentrifugation suggest that the extracellular domain of the Siglec-7 receptor dimerizes through the C-terminal IgC2 domain. Key words Siglec-7, NK cells, sialic acid, HEK 293S GnTI- , recombinant production, dimerization, analytical ultracentrifugation

4 Abstrakt Siglec-7 je transmembránový receptor vyskytující se zejména na povrchu NK buněk, kde se podílí na inhibici imunitní odpovědi v závislosti na vazbě ligandu obsahujícího kyselinu sialovou. Extracelulární část tohoto receptoru se skládá z imunoglobulinové domény typu V, která je zodpovědná za rozpoznávání kyseliny sialové, a dvou domén typu C2. Struktura domény typu V byla vyřešena pomocí rentgenové krystalografie, avšak struktura celé extracelulární domény dosud nebyla objasněna. Nejnovější poznatky však naznačují, že tvoří nekovalentní homodimer. V rámci této práce byla provedena rekombinantní produkce pěti zkrácených konstruktů extracelulární domény receptoru Siglec-7 v buněčné linii HEK293S GnTI- , jejich charakterizace a strukturní studie s cílem určit domény zodpovědné za dimerizaci tohoto receptoru. Výsledky z analytické ultracentrifugace naznačují, že extracelulární doména receptoru Siglec-7 dimerizuje prostřednictvím C-koncové IgC2 domény. Klíčová slova Siglec-7, NK buňky, kyselina sialová, HEK 293S GnTI- , rekombinantní produkce, dimerizace, analytická ultracentrifugace