Asociace polymorfismů v genu SIGLEC-3 s autoimunitními chorobami

Abstract

This thesis investigates the role of the inhibitory receptor Siglec-3 (CD33) in autoimmune diseases (AD), specifically multiple sclerosis (MS), type 1 diabetes (T1D), and celiac disease (CD). The objective was to perform genotyping of three selected polymorphisms (rs3865444, rs12459419, rs2455069), measure the surface expression of CD33 on monocytes, and evaluate phagocytic activity in patients compared to healthy controls. Genotyping was conducted on 74 subjects using PCR-RFLP and nested PCR methods. CD33 surface expression and phagocytic activity (production of reactive oxygen species following E. coli stimulation) were measured using flow cytometry. Data were analysed using non-parametric statistical tests and haplotype analysis (EM algorithm). The study identified the ACG risk haplotype for MS (p = 0.012) and the CTA and ACA haplotypes for CD (p = 0.024). In MS patients, a statistically significant increase in the proportion of classical monocytes was demonstrated. Regarding the phagocytic activity test, MS patients exhibited a higher relative count of positive monocytes (p = 0.0185) compared to controls. No significant associations with the monitored SNPs were found in type 1 diabetes. The results suggest that in CD, reduced functionality of the CD33 receptor contributes to the development of...

Práce se zabývá úlohou inhibičního receptoru Siglec-3 (CD33) u autoimunitních onemocnění (AO), konkrétně u roztroušené sklerózy (MS), diabetu 1. typu (T1D) a celiakie (CD). Cílem bylo provést genotypizaci tří vybraných polymorfismů (rs3865444, rs12459419, rs2455069), změřit povrchovou expresi CD33 na monocytech a zhodnotit fagocytární aktivitu u pacientů v porovnání se zdravými kontrolami. Genotypizace byla provedena u 74 subjektů pomocí metod PCR-RFLP a nested PCR. Povrchová exprese CD33 a fagocytární aktivita (produkce reaktivních forem kyslíku po stimulaci E. coli) byly měřeny pomocí průtokové cytometrie. Data byla vyhodnocena neparametrickými statistickými testy a haplotypovou analýzou (EM algoritmus). Byl odhalen rizikový haplotyp ACG pro MS (p = 0,012) a haplotypy CTA a ACA pro CD (p = 0,024). U pacientů s MS byl prokázán statisticky významný nárůst podílu subpopulace klasických monocytů. V testu fagocytární aktivity vykazovali pacienti s MS vyšší relativní počet pozitivních monocytů (p = 0,0185) oproti kontrolám. U diabetu 1. typu nebyla nalezena žádná signifikantní asociace se sledovanými SNP. Výsledky naznačují, že u CD přispívá k rozvoji zánětu snížená funkčnost receptoru CD33. U MS může naopak vysoce funkční varianta receptoru vést k nadměrnému útlumu mikroglií a nedostatečnému odklízení...