Vliv β-2 mikroglobulinu na signalizaci v makrofázích asociovaných s nádorem

Abstract

Significant mechanisms of tumor escape include reversible or irreversible downregulation of major histocompatibility complex class I (MHC-I) molecules, including changes in the expression of β2-microglobulin (β2m), which forms the light chain of MHC-I. In tumor cells, there is increased dissociation of β2m from MHC-I into the tumor microenvironment (TME). Originally, β2m was attributed with protumor properties, but recent studies suggest its broader role in the TME. In human monocytes, β2m has been found to induce pro-inflammatory polarization through interaction with the transforming growth factor β receptor (TGF-βR) receptor by activating the non-canonical TGF-β pathway. The aim of this thesis was to investigate the potential influence of β2m on signaling in tumor-associated macrophages (TAMs), which represent the most abundant subpopulation of the TME. Using Western blot and flow cytometry, we confirmed differing β2m production in the TC-1, TC-1/A9, and TC-1/dB2m tumor lines, where no β2m production was detected in the TC-1/dB2m line (with the β2m gene knocked out). Analysis of in vitro β2m secretion in cell supernatants using the ELISA method confirmed the absence of β2m secretion in the TC-1/dB2m cell line. TGF-β production was not detected in any of the cell lines. Detection of β2m and TGF-β...

Mezi významné mechanismy nádorového úniku patří reverzibilně či ireverzibilně snížená exprese molekul hlavního histokompatibilního komplexu I. třídy (MHC-I), včetně změn v expresi β2-mikroglobulinu (β2m), který tvoří lehký řetězec MHC-I. U nádorových buněk dochází ke zvýšené disociaci β2m z MHC-I do nádorového mikroprostředí (TME). Původně byly β2m přisuzovány pronádorové vlastnosti, ale poslední studie naznačují jeho širší působení v TME. U lidských monocytů bylo zjištěno, že β2m vyvolává interakcí s receptorem transformujícího růstového faktoru β (TGF-βR) prozánětlivou polarizaci monocytů aktivací nekanonické dráhy TGF-β. Tato diplomová práce si kladla za cíl prozkoumat možný vliv β2m na signalizaci v makrofázích asociovaných s nádorem (TAM), které tvoří nejpočetnější subpopulaci TME. Pomocí Western blotu a průtokové cytometrie jsme potvrdili rozdílnou produkci β2m u nádorových linií TC-1, TC-1/A9 a TC-1/dB2m, kdy u linie TC-1/dB2m (s vyřazeným genem pro β2m) nebyla produkce β2m prokázána. Analýza sekrece β2m in vitro v buněčných supernatantech pomocí metody ELISA potvrdila absenci sekrece β2m u buněčné linie TC-1/dB2m. Produkce TGF-β nebyla zaznamenána u žádné z buněčných linií. Detekce produkce β2m a TGF-β v nádorech prokázala přítomnost obou proteinů, neodhalila však žádné rozdíly v...