Vývoj UHPLC-MS/MS metody vhodné ke stanovení proléčiva ibrutinibu v krevním séru a lymfě

Abstract

The aim of this Bachelor thesis was to develop a UHPLC-MS/MS method for the determination of ibrutinib and prodrug 3 in blood serum and lymph. This method was used to monitor the release of the active substance in a model organism - the rat. First, the mass spectrometer setup was optimized, where MRM transitions for ibrutinib and prodrug 3 and their isotope-labelled substances were found. For ibrutinib were found two MRM transitions of 441,2 → 138,15 and 441,2 → 84,05. For ibrutinib-D5 were found the MRM transitions of 446,2 → 138,25 and 446,2 → 84,15. For prodrug 3 were found the MRM transitions of 1359 → 1358,9 and 1359 → 818,50. For isotope-labelled prodrug 3 were found the MRM transitions of 1364 → 546,1 and 1364 → 528,25. The method setup parameters were as follows: The chromatography column used was a InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 (2,1 x 50 mm, 1,9 𝜇m). The mobile phase consisted of acetonitrile (B) and formic acid (A), the flow rate of the mobile phase was 0.500 ml/min, the analysis time was 7.5 min at gradient elution (time: 0; 1.0; 3.0; 5.0; 5.5; 7.5 min, B: 35; 35; 100; 100; 35; 35 %). The method was linear (weighted regression 1/x2) with a regression coefficient higher than 0.999 for ibrutinib and prodrug 3, showing an excellent linearity of the method. The precision and te accuracy...

Cílem této diplomové práce bylo vyvinout UHPLC-MS/MS metodu pro stanovení ibrutinibového proléčiva 3 a samotného ibrutinibu v krevním séru a lymfě. Tato vyvinutá metoda byla použita ke sledování postupného uvolňování účinné látky v modelovém organismu, kterým byla krysa. Nejprve bylo optimalizováno nastavení hmotnostního spektrometru, kde byly nalezeny dva MRM přechody pro ibrutinib, proléčivo 3 a jejich isotopicky značené standardy. Pro ibrutinib byly nalezeny MRM přechody, 441,2 → 138,15 a 441,2 → 84,05. Pro isotopicky značený ibrutinib byly sledovány MRM přechody 446,2 → 138,25 a 446,2 → 84,15. Pro proléčivo 3 byly nalezeny MRM přechody 1359 → 1358,9 a 1359 → 818,50. Pro isotopicky značené proléčivo 3 byly nalezeny MRM přechody 1364 → 546,1 a 1364 → 528,25. Parametry pro nastavení metody byly následující: chromatografická kolona byla použita InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 (2,1 x 50 mm, 1,9 𝜇m). Mobilní fáze se skládala z acetonitrilu (B) a kyseliny mravenčí (A), průtok mobilní fáze byl 0,500 ml/min, doba analýzy byla 7,5 minut při gradientové eluci (čas: 0; 1,0; 3,0; 5,0; 5,5; 7,5 min, B: 35; 35; 100; 100; 35; 35 %). Metoda byla lineární (vážená lineární regrese 1/x2 ) s koeficientem regrese nad 0,999 pro ibrutinib i proléčivo v séru i lymfě. Dosažené hodnoty přesnosti a správnosti metody...