Příprava potkaního NK buněčného receptoru NKR-P1B a jeho ligandu Clr11 a studium jejich interakce

Abstract

NK cells lie at the interface between innate and adaptive immunity. Their primary role is to eliminate tumor or virus-infected cells. Their cytotoxic activity is regulated by tight balance between activating and inhibitory receptors, which NK cells express on their surface and through which they receive signals from target cells. An example of an inhibitory receptor is the rat NKR-P1B, which interacts with inhibitory ligand Clr11. This ligand is expressed on the surface of most healthy cells and its expression is downregulated in response to tumor transformation or viral infection (esp. cytomegalovirus), which leads to activation of NK cell cytolytic activity. Both the NKR-P1B receptor and the Clr11 ligand are members of the structural family of C-type lectin-like proteins, thus the characteristic CTLD domain is present in both of their structures. Their interaction and inhibitory nature have been confirmed before and the structure of their complex has been characterized by crystallography. The aim of this project is recombinant production of the NKR-P1B receptor and Clr11 ligand in order to further characterize their interaction.

NK buňky neboli přirození zabíječi stojí na pomezí vrozené a adaptivní imunity a jejich úkolem je likvidace nádorově transformovaných či virem napadených buněk. Cytotoxická aktivita NK buněk je regulována pomocí rovnováhy mezi aktivačními a inhibičními receptory na jejich povrchu, skrze které přijímají příslušné signály od cílových buněk. Příkladem inhibičního receptoru je potkaní NKR-P1B, který rozpoznává inhibiční ligand Clr11. Tento ligand je exprimován na povrchu zdravých buněk a v důsledku nádorové transformace či nákaze virem (typicky cytomegalovirem) je jeho exprese snížena, což podněcuje NK buněčnou cytolytickou aktivitu. Jak receptor NKR-P1B, tak i ligand Clr11 patří do strukturní rodiny proteinů podobných lektinům C-typu, které jsou charakteristické přítomností konzervovaného strukturního motivu domény podobné lektinům C-typu (CTLD). Jejich interakce a inhibiční povaha byla již potvrzena, stejně tak jako způsob jejich vazby v krystalu. Cílem této práce je rekombinantní příprava těchto proteinů za účelem další charakterizace jejich vazby.