Značené konstrukty galektinů pro biomedicínské aplikace

Abstract

Galectins are a family of animal lectins characterised by their affinity for terminal β-D- galactosides and the presence of an evolutionarily conserved carbohydrate recognition domain (CRD). In vivo, galectins are involved in a wide range of cellular processes, including adhesion, signalling, and apoptosis. Their roles in inflammation and cancer make them attractive targets for diagnostic and therapeutic applications. The galectin family consists of 15 members, 11 of which are expressed in human tissue. Based on their structural features, galectins are classified into three groups: prototypical, tandem-repeat, and chimeric. So far very scarcely studied galectin-7 (Gal-7) belongs to the prototypical group. It contains a single CRD, but is capable of forming non-covalent dimers. It is involved in epithelial cell differentiation, apoptosis and carcinogenesis. Studying galectin function and ligand interactions often requires specific protein labeling. Common strategies include fluorescent labeling or biotinylation using an AVI-tag (GLNDIFEAQKIEWHE), a 15-amino acid sequence specifically recognised by biotin ligase. This method enables efficient in vivo labeling without substantially altering the function or properties of the protein of interest. In this study, a Gal-7 construct containing an AVI-tag...

Galektiny jsou živočišné lektiny vyznačující se svojí afinitou k terminálním β-D- galaktosidům a svou evolučně konzervovanou doménou rozpoznávající sacharidy (CRD). V lidském organismu jsou zapojeny do širokého spektra buněčných procesů včetně buněčné adheze, signalizace a apoptózy. Galektiny jsou často spojovány s patofyziologickými stavy, jako je zánět či nádorová progrese, a stávají se tak předmětem zájmu v oblasti diagnostiky a cílené terapie. Proteinovou rodinu galektinů tvoří 15 členů, z nichž 11 je exprimováno v lidské tkáni. Na základě struktury jsou klasifikovány do tří skupin: prototypické, tandemové a chimerické. Dosud velmi málo studovaný galektin-7 (Gal-7) se řadí mezi prototypické galektiny, jelikož obsahuje pouze jednu CRD, je ale schopen nekovalentní dimerizace. Hraje roli například v diferenciaci epitelových buněk, apoptóze a karcinogenezi. Studium funkce galektinů a jejich interakcí s ligandy často vyžaduje jejich specifické značení. Mezi používané metody značení proteinů patří například fluorescenční značení nebo biotinylace s využitím tzv. AVI-kotvy (GLNDIFEAQKIEWHE). AVI-kotva je sekvence 15 aminokyselin rozpoznávaná biotinligasou, která umožňuje efektivní značení in vivo bez zásadního ovlivnění funkcí a vlastností proteinu. V rámci této práce byl připraven konstrukt Gal-7...