Vplyv aktivácie TRH receptora na poškodenie DNA

Abstract

G-protein-coupled receptors (GPCRs) are best known for their role in sensing extracellular signals and transducing them into intracellular responses. Althought traditionally associated with endocrine, metabolic, or neural functions, certain GPCRs have recently been implicated in cellular responses to genotoxic stress. In this study, we focused on the thyrotropin-releasing hormone (TRH) receptor and investigated whether its activation by the synthetic superagonist taltirelin affects DNA integrity or cell survival in GH1 pituitary tumor cells. The GH1 cell line was selected based on previous phosphoproteomic data suggesting a possible link between TRH signaling and cellular stress pathways. The experimental design involved treating the cells with taltirelin, both alone and in combination with established genotoxic agents: dimethyl sulfoxide (DMSO) and hydrogen peroxide (H₂O₂). To evaluate the outcomes, we measured key markers of cell viability and DNA damage. Cell survival was measured using the Alamar Blue assay, and while cytotoxicity was assessed by quantifying the release of lactate dehydrogenase (LDH) into the culture medium. DNA damage was evaluated by detecting phosphorylated histone H2AX (γH2AX), monitoring levels of poly-ADP-ribosylated proteins, and analysing comet assays. In addition, we...

Receptory spřažené s G-proteiny (GPCR) jsou nejznámější pro svou roli ve vnímání extracelulárních signálů a jejich přenosu do intracelulárních reakcí. Ačkoliv jsou tradičně spojovány s endokrinními, metabolickými nebo nervovými funkcemi, některé GPCR se nedávno ukázaly být zapojeny do buněčných odpovědí na genotoxický stres. V této studii jsme se zaměřili na receptor hormonu uvolňujícího tyreotropin (TRH) a zkoumali jsme, zda jeho aktivace syntetickým superagonistou taltirelinem ovlivňuje integritu DNA a membrán buněk nebo přežití buněk v nádorových buňkách hypofýzy GH1. Buněčnou linii GH1 jsme vybrali na základě předchozích fosfoproteomických dat, která naznačují možnou souvislost mezi signalizací TRH a cestami buněčného stresu. Experimentální plán zahrnoval ošetření buněk taltirelinem, a to samostatně i v kombinaci se zavedenými genotoxickými sloučeninami: dimethylsulfoxidem (DMSO) a peroxidem vodíku (H₂O₂). Pro posouzení výsledků jsme monitorovali klíčové markery životaschopnosti buněk a poškození DNA. Životaschopnost buněk byla detekována pomocí testu Alamar Blue a cytotoxicita stanovena měřením LDH. Poškození DNA bylo hodnoceno detekcí fosforylovaného histonu H2AX (γH2AX), mírou poly-ADP-ribosylace proteinů a kometovou analýzou. Kromě toho jsme optimalizovali TUNEL test pro buňky GH1 a ověřili...