Studium kvality spermií za využití proteinu CD46.

Abstract

Currently, there is an increasing emphasis on sperm quality assessment, moving away from the dogma of previous years, when sperm was considered merely a carrier delivering genetic information to its destination. Sperm quality is assessed based on various parameters, but conventional semen analysis has only limited predictive value for ultimate fertility in the field. One of the new potential markers of sperm quality is the glycoprotein CD46, for example in human and mouse sperm. This study investigated the membrane glycoprotein CD46 as a potential molecular biomarker of bull sperm quality. The main objectives were to accurately localize CD46 in bull sperm and to evaluate its usefulness in distinguishing between high- and low-fertility bulls. Methodological protocols for the immunodetection of CD46 were systematically optimized. A custom- developed, bovine-specific recombinant CD46 antibody (rAbCD46) demonstrated higher detection efficiency compared to a commercial antibody designed for the human model. Based on field records, bulls were divided into high- and low-fertility groups and comprehensively analyzed using computer-assisted sperm analysis (CASA) for motility analysis, the TUNEL test for DNA fragmentation, acrosome damage analysis by PNA lectin staining, and immunodetection of CD46 protein,...

V současné době je kladen stále větší důraz na hodnocení kvality spermií a opouští se tak od dogma minulých let, kdy byla spermie považována pouze za nosiče doručující genetickou informaci na místo určení. Kvalita spermií se hodnotí na základě různých parametrů, avšak konvenční analýza spermatu má jen omezenou prediktivní hodnotu pro výslednou plodnost v terénu. Jedním z nových potenciálních markerů kvality spermií je glykoprotein CD46, a to například u lidských a myších spermií. Tato studie zkoumala membránový glykoprotein CD46 jako potenciální molekulární biomarker kvality býčích spermií. Hlavními cíli bylo přesně lokalizovat CD46 v býčích spermiích a zhodnotit jeho využitelnost při rozlišování býků s vysokou a nízkou plodností. Byly systematicky optimalizovány metodické protokoly pro imunodetekci CD46. Na míru vyvinutá, bovinně specifická rekombinantní protilátka CD46 (rAbCD46) prokázala vyšší účinnost detekce ve srovnání s komerční protilátkou určenou pro lidský model. Býci byli na základě záznamů z terénu rozděleni do skupin s vysokou a nízkou plodností a byli komplexně analyzováni pomocí počítačem asistované analýzy spermií (CASA) pro analýzu motility, testu TUNEL pro určení fragmentace DNA, analýzy poškození akrozomu barvením PNA lektinem a imunodetekce proteinu CD46, analýzy energetického...