Elektroforetické stanovení aminokyselin v detritu

Abstract

This bachelor thesis deals with the determination of amino acids in detritus by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection. The analysis procedure was adopted and modified based on published methods. Amino acids were derivatized with the 3-(2-furoyl)quinoline-2-carboxyaldehyde reagent and subsequently analyzed under optimized conditions. The separation was carried out in background electrolyte consisting of 20 mmol dm-3 disodium tetraborate with 20 mmol dm-3 SDS at pH 9.2. The internal standard used was L-norleucine. Thirteen amino acids could be quantified by the method: Gln, His, Asn, Tyr, Gly, Glu, Asp, Ala, Ser, Thr, Val, Phe, and Leu. The repeatability of the method was evaluated. Relative standard deviations were below 2 % for migration times and between 1.7-7.9 % for peak areas at the 0.1 mmol dm−3 concentration level. For the 0.01 mmol dm−3 concentration level, the relative standard deviations of migration times were slightly higher, up to 6.5 %, and for peak areas they ranged between 3,4 and 14,2 %. Limits of detection ranged from 0.42-29 µmol dm-3 and limits of quantitation were between 1.4-97 µmol dm-3 . The method was applied to three real detritus samples in which six to ten amino acids were identified. Specifically, Gln, His, Asn, Tyr, Gly, Glu, Asp, Ala, Ser,...

Tato bakalářská práce se zabývá stanovením aminokyselin v detritu pomocí kapilární elektroforézy s laserem indukovanou fluorescenční detekcí. Postup analýzy byl převzat a upraven na základě publikovaných metod. Aminokyseliny byly derivatizovány činidlem 3-(2-furoyl)chinolin-2-karboxyaldehyd a následně analyzovány za optimalizovaných podmínek. Separace byla prováděna v základním elektrolytu tvořeném 20 mmol dm−3 tetraboritanem disodným s 20 mmol dm−3 SDS při pH 9,2. Jako inertní standard byl použit L-norleucin. Metodou bylo možné stanovit třináct aminokyselin: Gln, His, Asn, Tyr, Gly, Glu, Asp, Ala, Ser, Thr, Val, Phe a Leu. Byla hodnocena opakovatelnost metody. Hodnoty relativní směrodatné odchylky migračních časů se pohybovaly do 2 %, u ploch píků byly mezi 1,7-7,9 % pro koncentraci 0,1 mmol dm−3 , pro koncentraci 0,01 mmol dm−3 byla relativní směrodatná odchylka migračních časů o něco vyšší do 6,5 % a pro plochy píků se hodnota pohybovala mezi 3,4 a 14,2 %. Mez detekce se pohybovala v rozmezí 0,42-29 µmol dm−3 a mez stanovitelnosti byl mezi 1,4-97 µmol dm−3 . Metoda byla aplikována na tři reálné vzorky detritu, ve kterých byla identifikováno šest až deset AMK. Konkrétně se podařilo stanovit Gln, His, Asn, Tyr, Gly, Glu, Asp, Ala, Ser, Phe a Leu, přičemž největší zastoupení měly aminokyseliny Glu,...