Syncytin-2 a jeho fúzogenní schopnost

Abstract

Fenomén buněčné fúze je nezbytnou součástí fyziologie lidské placenty, kde splýváním cytotrofoblastových buněk vzniká syncytiotrofoblast - struktura tvořící rozhraní mezi matkou a plodem. Za tento proces jsou zodpovědné povrchové fúzogenní glykoproteiny retrovirového původu Syncytin-1 a Syncytin-2 skrze interakci se svými receptory ASCT2 a MFSD2a. Studium těchto interakcí je omezeno na využívání in vitro modelů v podobě buněčných kultur. Tématem diplomového projektu byl výzkum fúzogenních schopností Syncytinu-2. První část práce se týkala přípravy buněčné linie HEK293T bez endogenní exprese MFSD2a, která je důležitou součástí testování fúzogenní aktivity Syncytinu-2.Dále byl navržen a optimalizován duální systém založený na komplementaci fluorescenčního proteinu mScarlet a NanoLuc luciferázy, který umožnil detekci a kvantifikaci buněčných fúzí. Pomocí tohoto duálního testu byla charakterizována fúzogenní aktivita vybraných povrchových glykoproteinů a otestován vlivinterferonualfa na Syncytinem-1zprostředkovanoufúzi buněk. Dále byla zrekonstruována ancestrální sekvence Syncytinu-2 a v blízké budoucnosti bude testována její fúzogenní schopnost. Ancestrální sekvence bude použita i v experimentech týkajících se adaptace lidského Syncytinu-2 na protivirovou buněčnou imunitu. Pochopení interakce Syncytinu-1 a...

Cell-cell fusionis essential for placental physiology,takingplace in cytotrophoblastic cells that form the syncytiotrophoblast,a structure that establishes the feto-maternal interface.Syncytin- 1 and Syncytin-2,fusogenic glycoproteins of retroviral origin,trigger this process throughtheir interactions with the receptors ASCT2 and MFSD2a, respectively. The investigation of these interactions is limited to in vitro models utilizing cell culture. This study explores Syncytin-2 and its fusogenic properties. MFSD2a-deficient HEK293T cells were generated as they are a critical component of the Syncytin-2experimental framework.Adual system for detectingcell- cell fusion was developed and implemented. This system utilizes NanoLuc and mScarlet split reporters to facilitate the detectionof cell-cell fusion.The dual system was used to compare the fusogenic activity of the selectedenvelope glycoproteins andtoanalyze the impact of interferon alpha on Syncytin-1-mediated fusion. Further, the ancestral sequence of Syncytin-2 was reconstructed.Ancestral Syncytin-2 will be tested for its fusogenic capability and included in an upcoming study examining the adaptation of human Syncytin-2 to antiviral defense mechanisms.Investigatingthe interactions betweenhumanSyncytin-1andSyncytin-2andtheir respective receptors, along with...