Studium účinků oxidačního stresu na plazmatickou membránu kvasinek pomocí fluorescenčních sond

Abstract

The fluorescent probe C11-BODIPY581/591 is used to monitor the rate of lipid perox- idation in living cells. The aim of this work was to develop a method using this probe to measure the rate of lipid oxidation in the yeast plasma membrane. After optimising of the experimental parameters and yeast preparation for each experiment, the localisation of the probe in cells, its non-toxicity to yeast, and its sensitivity to different types of oxygen and nitrogen reactive species were determined. Hydroxyl radicals, singlet oxygen, hypochlorite anions and nitrogen dioxide or peroxynitrite induced the strongest oxidative reaction on the cells. The extent of membrane oxidation of different yeast strains caused by these radicals was measured using the newly developed method.

Fluorescenční sonda C11-BODIPY581/591 slouží ke sledování míry peroxidace lipidů v živých buňkách. Cílem této práce bylo vyvinutí metody využívající této sondy pro mě- ření míry oxidace lipidů v plazmatické membráně kvasinek. Po optimalizaci parametrů měření a přípravy kvasinek před měřením byla stanovena lokalizace sondy v buňkách, její neškodnost vůči kvasinkám a ověřena její citlivost vůči různým typům kyslíkových a dusí- kových radikálů. Nejsilnější oxidační reakci na buňkách vyvolávaly hydroxylové radikály, singletní kyslík, chlornanové anionty a oxid dusičitý, případně peroxynitrit. Nově vyvinu- tou metodou byla změřena míra oxidace membrán různých kmenů kvasinek způsobená zmíněnými radikály.