Vývoj, optimalizace a validace analytické metody LC-MS/MS pro stanovení hladin vybraných antimykotik v séru a její zavedení do klinické praxe

Abstract

Antifungals belong to a group of drugs that are indicated for the treatment of mycotic diseases. Therapy of these diseases is often difficult and its early initiation is a key factor in the patient's cure. Regular therapeutic monitoring of antifungal serum levels can lead not only to optimization of the correct dosage setting, when the probability of treatment success on patient prognosis is clearly increased, but also to the detection of possible drug-drug interactions. The theoretical part of the thesis focused on a literature research concerning the determination of antifungal agents, mainly using the instrumental technique of liquid chromatography coupled with mass detection (LC-MS/MS). The experimental part of the thesis was focused on the development and optimization of the LC-MS/MS method. A liquid chromatography system coupled with a tandem mass spectrometry was used. A C18 column was used to separate the analytes. Mobile phase 1 was used consisting of eluent A containing H2O/methanol (90:10) with the addition of 5 mM ammonium formate and 0,01% formic acid and eluent B consisting of methanol with the addition of 5 mM ammonium formate with 0,01% formic acid. The separation of the analytes was carried out under gradient elution conditions. Transitions between parent and daughter ions were...

Antimykotika patří do skupiny léčiv, která se indikují k léčbě mykotických onemocnění. Terapie těchto onemocnění je velmi často obtížná a její včasné zahájení je klíčovým faktorem k vyléčení pacienta. Pravidelné terapeutické monitorování hladin antimykotik v séru může vést nejen k optimalizaci nastavení správného dávkování, kdy se jednoznačně zvyšuje pravděpodobnost úspěšnosti léčby na prognózu pacienta, ale také k odhalení případných vzájemných lékových interakcí. Teoretická část diplomové práce byla zaměřena na literární rešerši týkající se stanovení antimykotických látek, a to především s využitím instrumentální techniky kapalinové chromatografie ve spojení s hmotností detekcí (LC-MS/MS). Experimentální část diplomové práce byla zaměřena na vývoj a optimalizaci LC- MS/MS metody. Byl použit systém kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovým hmotnostním detektorem typu trojitý kvadrupól. K separaci analytů byla použita kolona C18. Byla použita mobilní fáze 1 složená z eluentu A, který obsahoval H2O/methanol (90:10) s přídavkem 5 mM mravenčanu amonného a 0,01% kyseliny mravenčí a eluentu B složeného z methanolu s přídavkem 5 mM mravenčanu amonného s 0,01% kyselinou mravenčí. Separace analytů probíhala za podmínek gradientové eluce. Sledované analyty byly identifikovány na základě...