Využití kapalinové chromatografie při kontrole obsahu radikálů ve farmaceutických expcipientech

Abstract

This thesis focuses on the characterization of the reaction between the TEMPO radical and three radical scavengers - reduced glutathione, coumarin, and ascorbic acid - with the aim of identifying a suitable scavenger for the quantification of radicals in a pharmacological samples. First, the purity and stability of the TEMPO radical in various solvents were verified. Furthermore, the conditions for the determination of reduced glutathione (GSH) and oxidized glutathione (GSSG) were optimized using a C18 reverse-phase HPLC column with a UV-Vis spectrometric detector at 215 nm. Using 0.1% trifluoroacetic acid and acetonitrile in a 98:2 ratio, an injection volume of 5 µL, a flow rate of 0.3 mL·min⁻¹, and a column temperature of 30 řC, both peptides were effectively separated at retention times of approximately one and a half and two and a half minutes (based on calibration curve created for both peptides LODGSH = 0.15 µmol·dm-3 ; LOQGSH = 0.50 µmol·dm-3 ; LODGSSG = 0.06 µmol·dm-3 ; LOQGSSG = 0.19 µmol·dm-3 ), respectively. The reaction between the TEMPO radical and GSH was then characterized over time. In connection with this, the dependence of oxidized glutathione concentration on the concentration of the radical was also investigated. It was concluded that the reaction does not proceed linearly and...

Tato diplomová práce se zaměřuje na charakterizaci reakce mezi radikálem TEMPO a třemi radikálovými scavengery, redukovaným glutathionem, kumarinem a askorbovou kyselinou, za účelem nalezení vhodného scavengeru pro kvantifikaci radikálů ve farmakologických vzorcích. Nejprve byla v této práci ověřena čistota a stabilita radikálu TEMPO v různých rozpouštědlech. V rámci práce byly dále optimalizovány podmínky stanovení redukovaného glutathionu (GSH) a oxidovaného glutathionu (GSSG) metodou RP-HPLC na koloně C18 s UV-Vis spektrometrickým detektorem při 215 nm. Za použití 0,1% trifluoroctové kyseliny a acetonitrilu v poměru 98:2, s nástřikem 5 µl, průtokem 0,3 ml·min-1 a teplotou na koloně 30 řC se podařilo oba peptidy efektivně separovat a to při elučních časech okolo jedné a půl, respektive dvou a půl minuty (podle kalibračních závislostí vytvořených pro peptidy LODGSH = 0,15 µmol·dm-3 ; LOQGSH = 0,50 µmol·dm-3 ; LODGSSG = 0,06 µmol·dm-3 ; LOQGSSG = 0,19 µmol·dm-3 ). Dále byla časově charakterizována reakce mezi radikálem TEMPO a redukovaným glutathionem, v návaznosti na to také závislost koncentrace vznikající oxidované formy na koncentraci radikálu. Bylo usouzeno, že reakce neprobíhá lineárně a za vzniku jednoho produktu, proto byla provedena MS-analýza vznikajících produktů. Dále byla vyvinuta...