Adaptorový protein STING a regulace jeho funkce během polyomavirové infekce

Abstract

Protein STING (Stimulator of interferon genes) je důležitou součástí signalizační dráhy pro aktivaci vrozené imunitní odpovědi. Jde o adaptorový protein, který aktivují některé DNA senzory jako je například protein cGAS nebo IFIX. To aktivuje cGAS-STING signalizační dráhu, která způsobí expresi prozánětlivých cytokinů a interferonů typu I. Při infekci polyomaviry byla pozorována snížená produkce interferonů, i když protein STING byl aktivován. Z toho lze usuzovat, že polyomaviry nějakým způsobem regulují funkci proteinu STING, ale zatím není jasné jak. Cílem práce bylo zjistit, jakým způsobem k tomu dochází. Byla sledována lokalizace proteinu STING v buňkách infikovaných BK polyomavirem, pomocí imunofluorescence. Protein STING se u infikovaných buněk nacházel v endoplazmatickém retikulu, také v trans-Golgiho aparátu a v malém množství i v autofagozomech, které se díky infekci vytvořily. Dále byl zjišťován interaktom proteinu STING v infikovaných buňkách, protože interagující proteiny mohou mít na protein STING aktivační nebo inhibiční funkci. Pro hledání interakčních partnerů byl připraven expresní vektor, který umožnil izolaci komplexů proteinu STING metodou pull down. Následnou analýzou komplexů bylo hmotnostní spektrometrií identifikováno 188 potencionálních interakčních partnerů, ale pro...

The protein STING (Stimulator of interferon genes) is an important part of the signaling pathway for the activation of the innate immune response. It is an adapter protein to which certain DNA sensors such as cGAS or IFIX protein. This activates the cGAS-STING signaling pathway and it causes the expression of pro-inflammatory cytokines and type I interferons. Polyomavirus infection can reduced production of interferons, although the protein STING was activated. This suggests that polyomaviruses can regulation the function of the STING protein, but it is not yet clear how. The aim of the work was to find out how this happens. The localization of the STING protein in BK polyomavirus infected cells was monitored using immunofluorescence. In infected cells, the STING protein was found in the endoplasmic reticulum, also in the trans-Golgi apparatus, and in small amounts in the autophagosomes that were formed as a result of the infection. It was investigated the interactome of the STING protein in infected cells, as the interacting proteins may have an activating or inhibitory function on the STING protein. To search for interaction partners, an expression vector was prepared that enabled the isolation of STING protein complexes by the pull down method. Subsequent analysis of the complexes identified 188...