Vývoj antibakteriálních protilátek pro pacienty s cystickou fibrosou

Abstract

Cystická fibrosa (CF) je život ohrožující multisystémové onemocnění způsobeno mutací v CFTR genu a tím i dysfunkci CFTR proteinu. U pacientů s CF dochází k rozsáhlému spektru poruch v organismu a s tím spojených komplikací. Mezi tyto komplikace se řadí například infekce dýchacích cest způsobena bakterií Pseudomonas aeruginosa (PA). Bakterie PA se váže především v hustém hlenu v plicích, kde se adaptuje na prostředí a pomocí svých virulentních faktorů infikuje hostitelské buňky. Velkou nevýhodou pro pacienty s CF je její resistence vůči antibiotikům. Předmětem této studie je právě bakterie PAa její bakteriální bičík složený z globulárního proteinu flagelinu. Flagelin je jeden z hlavních virulentních faktorů, který se podílí nejen na pohybu bakterie, ale také na adherenci k eukaryotním buňkám. Cílem práce bylo tedy omezit adherenci bakterií PA na povrch buněk přes bakteriální bičík. Proto byla provedena izolace flagelinu z baterie PA (kmen PAK ST 1763) a následná imunizace slepic tímto antigenem. Ze žloutků vajec byly izolovány specifické protilátky proti flagelinu, jejichž imunoreaktivita a specifita byla studována pomocí metod ELISA a "Western blotting". Inhibiční účinek protilátek byl následně zkoumán adherenčními testy s fluorometrickým vyhodnocením, v nichž protilátky vykazovaly inhibici adhese...

Cystic fibrosis (CF) is a life-threatening multisystem disease caused by a mutation in the CFTR gene, leading to CFTR protein dysfunction. Patients with CF experience a wide range of disorders in the body and associated complications. Among these complications are respiratory tract infections caused by the bacterium Pseudomonas aeruginosa (PA). PA primarily binds in the thick mucus in the lungs, where it adapts to the environment and infects host cells using its virulence factors. A significant disadvantage for CF patients is its resistence to antibiotics. This study focuses on the PA bacterium and its bacterial flagellum, composed of the globular protein flagellin. Flagellin is one of the main virulence factors involved not only in the bacterium's movement but also in its adherence to eukaryotic cells. The aim of the work was to reduce the adherence of PA bacteria to cell surfaces via the bacterial flagellum. Therefore, flagellin was isolated from PA bacteria (strain PAK ST 1763), followed by immunization of chicken with this antigen. Specific antibodies against flagellin were isolated from egg yolks, and their immunoreacticity and specifity were studied using ELISA and "Western blotting" methods. The inhibitory effect of the antibodies was then examined through adhesion assays with fluorometric...