Analýza sterolových lipidů v patogenních kvasinkách rodu Candida

Abstract

Cílem této práce bylo analyzovat celkové množství sterolů u patogenních kvasinek rodu Candida jako je C. albicans, C. glabrata, C. parapsilosis a C. guilliermondii. Podařilo se nám vybrat vhodný postup pro dezintegraci kvasinek, extrakci lipidů a optimalizovat podmínky pro LC/MS analýzu. V této práci jsme analyzovali tyto lipidy: ergosterol, lanosterol a ergosta-5,7,22,24(28)-tetraenol. Zjistili jsme, že kvasinky disponují různým obsahem sterolů, který se může v průběhu růstově křivky měnit. Největším obsahem sterolů na začátku růstové křivky disponují kvasinky C. albicans a C. glabrata. Následně dochází v pozdějších fází růstové křivky ke snížení koncentrací na hodnoty řádově shodné s koncentracemi u C. parapsilosis a C. guilliermondii. Podařilo se nám vypěstovat kmeny pasážované v přítomnosti subinhibiční koncentrace antimykotika flukonazolu, které na rozdíl od nepasážovaných kvasinek vykazovaly nižší koncentrace ergosterolu a odlišnou míru rychlosti změny koncentrace sterolů při vystavení těchto kvasinek různým dávkám flukonazolu. Analýzou koncentrací sterolů jsme zjistili, že všechny kvasinky reagují různou měrou na přídavek DMSO. Klíčová slova: Candida albicans, Candida glabrata, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, rezistence, flukonazol, ergosterol

The aim of this work was to analyze the total amount of sterols in pathogenic yeasts of the genus Candida, such as C. albicans, C. glabrata, C. parapsilosis and C. guilliermondii. We established a suitable procedure for the disintegration of yeasts, extraction of lipids, and optimized the conditions for LC/MS analysis. We analyzed the followings lipids in this study: ergosterol, lanosterol, and ergosta-5,7,22,24(28)-tetraenol. We found that yeast had different sterol content that could change during the growth curve. The yeasts C. albicans and C. glabrata had the highest sterol contents at the beginning of the growth curve. Subsequently, in the later stages of the growth curve, the concentrations decreased to values of the same order as those in C. parapsilosis and C. guilliermondii. We passaged each of the yeast strains in presence of subinhibitory concentration of fluconazole that, in contrast to unpassaged yeast, showed lower ergosterol concentrations and a different rate of change in sterol concentration when these yeasts were exposed to different doses of fluconazole. By analyzing the sterol concentrations, we found that all yeasts responded to different extents to the addition of DMSO. Key words: Candida albicans, Candida glabrata, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, resistance,...