Příprava a charakterizace slepičích protilátek proti patogenní kvasince Candida albicans

Abstract

The increase of infections caused by yeast pathogens is an alarming global public health problem. People with compromised immune systems, such as after infection with human immunodeficiency virus or diabetes mellitus, are most at risk. Diagnosis is often inadequate, and treatment relies on a limited selection of antifungal drugs, to which resistance is also increasing. These aspects represent a major problem, as second-choice drugs, which may have toxic side effects (e.g., nephrotoxicity in the case of amphotericin B), must then be applied to resistant pathogens. Given the severity of yeast infections, scientists are trying to find new ways of protection against these pathogens. One option is passive immunotherapy. In this bachelor thesis, antibodies from hen's eggs were chosen for this purpose, as they have the potential for wide therapeutic use. The preparation of hen's egg yolk IgY antibodies is both ethically and economically acceptable. Moreover, egg yolk antibodies show relatively high stability. Polyclonal antibodies were isolated from eggs of hens immunized with either cell wall or whole C. albicans cells in a medium simulating the vaginal environment (VSF). Antibody reactivity was tested by ELISA. The cell walls of C. albicans in VSF medium or YPD medium were used as antigen. The results...

Nárůst počtu infekcí způsobených kvasinkovými patogeny je alarmujícím problémem celosvětového veřejného zdraví. Nejvíce jsou ohroženi lidé s narušeným imunitním systémem, jako např. po infekci virem lidské imunodeficience nebo při diabetes mellitus. Diagnostika je častokrát nedostatečná a léčba je odkázána na omezený výběr antimykotik, na která navíc narůstá rezistence. Tyto aspekty představují velký problém, jelikož je pak na rezistentní patogeny třeba podávat léky druhé volby, které mohou mít vedlejší toxické účinky (např. nefrotoxicita v případě amfotericinu B). Vzhledem k závažnosti kvasinkových infekcí je snaha najít způsob ochrany vůči těmto patogenům. Jednou z možností je pasivní imunoterapie. V této bakalářské práci byly pro tento účel zvoleny protilátky ze slepičích vajec, které mají potenciál širokého terapeutického použití. Příprava slepičích protilátek IgY ze žloutků vajec je jak z etického, tak ekonomického pohledu výhodná. Žloutkové protilátky navíc vykazují poměrně vysokou stabilitu. Z vajec slepic imunizovaných buď buněčnou stěnou nebo celými buňkami C. albicans po kultivaci v médiu simulujícím vaginální prostředí (VSF) byly izolovány polyklonální protilátky. Reaktivita protilátek byla testována metodou ELISA. Jako antigen byly použity buněčné stěny C. albicans kultivovaných v médiu...