Příprava polymerního terapeutika cílícího na CD20 pozitivní B lymfomy a NK buňky

Abstract

Malignant transformation of B-cells is manifested by a marked increase in the number of surface markers 20 (CD20, cluster of differentiation 20). In studying this trend, chimeric monoclonal antibodies targeting CD20 were introduced to induce apoptosis in B-lymphomas. Since the introduction of the first therapeutic monoclonal antibody rituximab, many others have been developed, with some still used to treat B-lymphomas today. Unfortunately, in many cases, resistance to these drugs is developing, and therefore the development of new types of therapeutics is still relevant. This work aims to develop a polymer-protein macromolecular conjugate capable of inducing apoptosis in CD20 positive leukemia cell lines. For this purpose, we work with biologically active vectors, so-called anti-CD20 nanobodies. This is a variable binding domain derived from the "heavy chain only" antibodies found in, e.g., llamas or camels. Compared to conventional antibodies, nanobodies are approximately ten times smaller, but their binding affinity for the antigen is not altered. For this reason, nanobodies are ideal candidates for attachment to a polymeric carrier, where poly-N-[2-(hydroxypropyl)methacrylamide] (pHPMA) was chosen in this work. The transpeptidase reaction catalyzed by recombinant sortase A, which recognizes and...

Maligní transformace B-buněk se projevuje výrazným zvýšením počtu povrchových znaků 20 (CD20, z angl. cluster of differentiation 20). Při studiu tohoto trendu byly představeny tzv. chimérické monoklonální protilátky cílící na CD20, které navozovaly apoptózu u B-lymfomů. Od zavedení prvního terapeutika rituximab bylo vytvořeno mnoho dalších, kdy některé se využívají k léčbě B-lymfomů dodnes. Bohužel v mnoha případech dochází k vývoji rezistence vůči těmto léčivům, a proto je příprava nových typů terapeutik stále aktuální. Tato práce si klade za cíl vytvořit makromolekulární konjugát typu polymer-protein schopný indukovat apoptózu u CD20 pozitivních leukemických linií. Za tímto účelem pracujeme s biologicky aktivními vektory, tzv. nanoprotilátkami (z angl. nanobody) anti-CD20. Jedná se o variabilní vazebnou doménu odvozenou od tzv. "heavy chain only" protilátek, které se vyskytují např. u lam či velbloudů. Ve srovnání s klasickými protilátkami jsou nanoprotilátky přibližně desetkrát menší, avšak jejich vazebná afinita vůči antigenu není pozměněna. Z tohoto důvodu jsou nanoprotilátky ideálními kandidáty pro připojení na polymerní nosič, kdy v této práci byl vybrán poly-N-[2-(hydroxypropyl)methakrylamid] (pHPMA). Pro připojení námi vyrobených nanoprotilátek byla vybrána transpeptidasová reakce...