Hodnocení metabolismu a exkrece endogenních látek a xenobiotik

Abstract

Despite the significant progress in analytical techniques, the development and validation of methods for determining endogenous compounds is still a challenging task due to the natural presence of the analyte in the investigated biological matrix. In contrast to xenobiotics, which do not normally occur in biological material, endogenous substances represent a fundamental problem leading to the impossibility of obtaining an analyte-free sample, the so-called blank, which is used in the development and validation of a new method for the preparation of reference samples. Several generally accepted procedures to solve this problem are described, such as the use of surrogate matrices, analyte-purified matrices, or surrogate analytes; however, the used procedures do not always meet the requirements for developing a reliable analytical method according to the given guidelines and regulations. This study aimed to propose an alternative approach in the preparation of validation reference samples while preserving the original biological matrix and solving the problem with the natural presence of analyzed compounds in these samples and, subsequently, apply the validated method as part of metabolomic studies focused on the research of selected liver diseases. The presented procedure is based on the standard...

Vývoj a validace metod pro stanovení endogenních sloučenin zůstává i přes velký pokrok v analytických technikách stále náročným úkolem, vzhledem k přirozené přítomnosti analytu ve zkoumané biologické matrici. Na rozdíl od xenobiotik, která se běžně v biologickém materiálu nevyskytují, představují endogenní látky zásadní problém vedoucí k nemožnosti získat analytu prostý vzorek tzv. blank, kterého se využívá při vývoji a validaci nové metody pro přípravu referenčních vzorků. Je popsáno několik obecně uznávaných a používaných postupů pro řešení tohoto problému, jako je použití náhradních matric, matric očištěných od analytu, nebo zástupných analytů, nicméně použité pracovní postupy však ne vždy splňují požadavky na vývoj spolehlivé analytické metody dle validačních směrnic a předpisů. Cílem této studie bylo navrhnout nový přístup v přípravě validačních referenčních vzorků při zachování povahy biologické matrice a vyřešení problému s přirozenou přítomností analyzovaných sloučenin v těchto vzorcích a validovanou metodu aplikovat v rámci metabolomických studií zaměřených na výzkum vybraných jaterních onemocnění v rámci klinického i základního výzkumu na in vivo modelech. Použitý postup je odvozen od metody standardního přídavku. Na rozdíl od klasické metody je však přídavek upraven dle zjištěné bazální...