Stanovení bitrexu pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie

Abstract

In this work, a method for the determination of bitrex (denatonium benzoate) using ultra- high performance liquid chromatography was developed. A Kinetex C18 column (Phenomenex) with dimensions of 100×2.1 mm and a particle size of 1.7 μm was used for the determination. A mixture of acetonitrile with 0.1% formic acid (component A) and deionized water with 0.1% formic acid (component B) was used as the mobile phase. The best separation was achieved with the gradient program set: 0-2 min: 20 % → 70 % A (vol. %); 2- 3 min: 70 % A (vol. %); 3-3,5 min: 70 % → 20 % A (vol. %); 3,5-5 min: 20 % A (vol. %). The temperature of the column during the separation was 40 řC and flow rate was 0,3 ml/min. The developed method was partially validated. Repeatability was measured, the linearity of the method was verified for sample injection 1 μl and 5μl. For the same sample injection limit of detection and limit of quantification was determined. Using the developed method, seven real samples containing bitrex were measured. These samples differed in matrix. The samples were five different coolants, glass cleaner and a washing gel for black clothing. In coolant Carline Antifreeze G13 (producer OMA CZ) the concentration of bitrex was set at 23,4 ppm. In coolant CS Antifreeze G 13 (producer CLASSIC Oil) the concentration...

V rámci této práce byla vyvinuta metoda pro stanovení bitrexu (denatonium benzoát) pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Pro stanovení byla použitá kolona Kinetex C18 (Phenomenex) s rozměry 100×2,1 mm a velikostí částic 1,7 μm. Jako mobilní fáze byla použita směs acetonitrilu s 0,1 % kyselinou mravenčí (složka A) a deionizované vody s 0,1 % kyselinou mravenčí (složka B). Poměr obou složek se v průběhu separace měnil na základě gradientového programu. Nejlepší separace bylo dosaženo při gradientovém programu: 0-2 min: 20 % → 70 % A (obj. %); 2-3 min: 70 % A (obj. %); 3-3,5 min: 70 % → 20 % A (obj. %); 3,5-5 min: 20 % A (obj. %). Teplota kolony během separace byla 40 řC a průtok mobilní fáze byl 0,3 ml/min. Metoda byla následně částečně validována. Byly proměřeny kalibrační křivky, byla měřena opakovatelnost, byla ověřena linearita metody při objemu nástřiku vzorku 1 μl a 5 μl. Poté byl pro stejné objemy nástřiku určen limit detekce a limit stanovitelnosti. Pomocí vyvinuté metody byly proměřeny reálné vzorky obsahující biterex. Tyto vzorky se však lišily v matrici. Jednalo se o pět chladicích kapalin, čistič na sklo a prací gel na černé prádlo. V chladicí kapalině Carline Antifreeze G13 (výrobce OMA CZ) byla koncentrace bitrexu experimentálně stanovena na hodnotu 23,4 ppm. V chladicí...