Porovnání různých skenů tandemové hmotnostní detekce v analýze kanabidiolu

Abstract

The aim of this bachelor thesis was to compare different tandem mass spectrometer scans in order to develop an LC-MS/MS method suitable for the determination of cannabidiol in rat serum. In this bachelor thesis the mass spectrometer and high-performance liquid chromatography method were optimized. The optimum parameters were as follows: chromatographic column Acquity UPLC BEH C18 50 × 2,1 mm, 1,7 μm from Waters (Wexford, Ireland). The mobile phase consisted of methanol and water of LC-MS purity. The flow rate of the mobile phase was 0,4 ml/min, the column temperature 40 řC, the temperature in an autosampler 15 řC, the sample injection volume was 1 μl and the analysis time was 7 minutes under gradient elution conditions. The MRM transitions of highest intensity were monitored. For CBD, the MRM transition in positive mode was 315,2 → 193,1 (Q1 = -10 V, CE = -24 V, Q3 = -20 V), for isotopically labeled cannabidiol D3 was chosen 318,4 → 196,0 (Q1 = -10 V, CE = -23 V, Q3 = -20 V). The calibrations in solvent and rat serum were performed in MRM and SIM mode. No calibration was constructed for the SCAN mode due to its low selectivity, which made it able to detect cannabidiol only from concentration of 312,5 ng/ml. The highly selective MRM was able to operate over the entire observed concentration range of...

Cílem této bakalářské práce bylo porovnat různé skeny tandemového hmotnostního spektrometru za účelem vyvinutí LC-MS/MS metody vhodné ke stanovení kanabidiolu v krysím séru. V rámci této bakalářské práce byla provedena optimalizace hmotnostního spektrometru a vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Optimální parametry byly následující: chromatografická kolona Acquity UPLC BEH C18 50 × 2,1 mm, 1,7 μm od firmy Waters (Wexford, Irsko). Mobilní fáze byla složena z methanolu a vody o LC-MS čistotě. Průtok mobilní fáze byl 0,4 ml/min, kolona byla temperována na 40 řC, teplota na dávkovači byla 15 řC, objem nástřiku vzorku byl 1 μl a doba analýzy 7 minut za podmínek gradientové eluce. Byly sledovány MRM přechody o nejvyšší intenzitě. Pro CBD se jednalo o MRM přechod v pozitivním režimu 315,2 → 193,1 (Q1 = -10 V, CE = -24 V, Q3 = -20 V), pro izotopicky značený kanabidiol D3 byl zvolen 318,4 → 196,0 (Q1 = -10 V, CE = -23 V, Q3 = -20 V). Byly provedeny kalibrace v rozpouštědle a krysím séru v režimu MRM a SIM. Nebyla sestrojena kalibrace pro mód SCAN vzhledem k jeho nízké selektivitě, kvůli níž byl schopen detekovat kanabidiol až od koncentrace 312,5 ng/ml. Vysoce selektivní MRM byl schopen pracovat v celém pozorovaném koncentračním rozsahu od 4,9 ng/ml do 625,0 ng/ml. Jako jediný z porovnávaných skenů...