Modifikace vnitřního povrchu kapilár pro elektroforetické separace liposomů

Abstract

Electroosmotic flow is one of the main factors that affect the resolution of separations in capillary electrophoresis and its modification is often necessary. One way of modification of the electroosmotic flow is the use of dynamic or permanent coating of the inner capillary surface. Such modifications during liposome separation can also reduce the tendency of liposomes to adsorb to the capillary surface. The aim of this work was to find a stable coating that will sufficiently eliminate the electroosmotic flow and to test its effect on the separation of liposomes. At first, the dynamic coatings of the capillary with Pluronic F-127, polyvinylpyrrolidone K30, polydiallyldimethylammonium chloride, polyethylene glycol and polyvinyl alcohol were tested using four different methods. Individual polymers and methods differed in the rate of elimination of the electroosmotic flow as well as in the stability of the capillary coatings. Dynamic coatings with Pluronic F-127, polyvinylpyrrolidone K30 and polydiallyldimethylammonium chloride were selected for further liposome separation testing. Fluorescently labeled liposomes were separated using capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection and the mobilities of liposomes separated using capillaries with different coatings were determined....

Elektroosmotický tok je jedním z hlavních faktorů, jež ovlivňují rozlišení separací v kapilární elektroforéze a často je nutná jeho modifikace. Jedním ze způsobů modifikace elektroosmotického toku je dynamické nebo permanentní pokrývání vnitřního povrchu kapiláry. Při separacích liposomů může taková modifikace navíc zmírnit jejich tendenci adsorbovat se na povrch kapiláry. Cílem práce bylo najít stabilní pokrytí, které bude dostatečně eliminovat elektroosmotický tok a otestovat jeho vliv na separace liposomů. Nejprve bylo testováno dynamické pokrytí kapiláry polymery Pluronic F-127, polyvinylpyrrolidon K30, polydialyldimethylamonium chlorid, polyethylenglykol a polyvinyalkohol pomocí čtyř různých metod pokrývání. Jednotlivé polymery a metody se lišily mírou potlačení elektroosmotického toku i stabilitou pokrytí. Z dynamických modifikací byla pro další testování separací liposomů zvolena pokrytí polymery Pluronic F-127, polyvinylpyrrolidon K30 a polydialyldimethylamonium chlorid. Liposomy s fluorescenční značkou byly separovány kapilární elektroforézou s laserem indukovanou fluorescenční detekcí a v jednotlivých pokrytích pak byla určena jejich mobilita. Nejvhodnější pro separace liposomů se jevilo pokrytí polymerem polyvinylpyrrolidon K30, ve kterém docházelo k nejmenším interakcím s liposomy v...