Příprava vazebné domény proteinu B7-H6 s vysokou afinitou

Abstract

Natural killer cells are part of innate immunity and play a key role in defending the organism. Their role in the defense against tumors and anti-tumor therapy has been the subject of multiple research projects because tumors are among the most frequent causes of death worldwide. Tumor therapy is often complicated and invasive; therefore, finding new therapeutic approaches that target naturally occurring defense mechanisms is advantageous. One of the key mechanisms used by NK cells to recognize tumor cells and eliminate them is signaling via their receptor NKp30. The binding of an activation ligand to this receptor can induce the activation of a cytotoxic response, leading to the elimination of the tumor cell. One of the activating ligands that can bind to NKp30 is B7-H6, a cell surface protein found on certain types of tumors. However, the interaction between B7-H6 and NKp30 has not been wholly described yet. This thesis focuses on different methods, which can be used for obtaining the B7-H6 domain bearing a fluorescent label, that could be used to visualize NKp30 on the cell surface, thus allowing for further description of the interaction between these molecules. KEY WORDS NK cells, NKp30, B7-H6, sortase A, HEK293

Přirozeně zabijácké buňky jsou součástí přirozené imunity a hrají důležitou roli při ochraně organismu. Zásadní jsou v obraně před nádorovými onemocněními a případně v protinádorové terapii. Proto jsou tyto buňky dlouhodobě předmětem mnoha výzkumů, neboť nádorová onemocnění představují celosvětově jednu z nejčastějších příčin úmrtí. Léčba těchto onemocnění bývá často složitá a invazivní, a proto je výhodné hledat nové terapeutické přístupy, které by využívaly již existující obranné mechanismy. Jedním z klíčových mechanismů, který NK buňky využívají pro rozpoznávání nádorových buněk a jejich eliminaci je receptor NKp30. Tento receptor může po vazbě aktivačního ligandu vyvolat cytotoxickou odpověď, která vede k likvidaci nádorové buňky. Jedním z aktivačních ligandů tohoto receptoru je protein B7-H6, jenž se přirozeně vyskytuje na povrchu buněk některých nádorů. Přesná podstata interakce B7-H6 a NKp30 však není dosud dokonale popsána. Tato práce se zabývá různými metodami přípravy fluorescenčně značené domény B7-H6, která by umožňovala vizualizaci receptoru NKp30 na povrchu buněk, čímž by přispěla k lepšímu popisu interakce těchto molekul. KLÍČOVÁ SLOVA NK buňky, NKp30, B7-H6, sortasa A, HEK293