Analýza promotorů genů kódujících faktory sigma u patogenních korynebakterií s využitím modelu Corynebacterium glutamicum

Abstract

The aim of this thesis was to idetify potential promoters of genes encoding sigma factors in pathogenic corynebacteria using the model bacterium Corynebacterium glutamicum and to assess the effect of amino acid sequences of sigma proteins on promoter recognition. Sigma factors are essential for transcription and regulation of gene expression and play a key role in controlling promoter activity. Understanding the regulation of genes encoding sigma factors is esential because they contribute to virulence and pathogenicity and regulate the host immune response. In this study, the promoter regions of genes encoding sigma factors in Corynebacterium ulcerans and Corynebacterium diphtheriae were analyzed. First, potential promoter sequences in the genomes of C. ulcerans and C. diphtheriae were identified based on knowledge of consensus sequences of confirmed promoters in the model organism. The already tested two-plasmid system established in C. glutamicum was used to evaluate the activity of the proposed promoter regions. A potentional promoter region was inserted into the pEPR1 vector upstream of the gfpuv reporter gene, and sigma factor genes were inserted downstream of the inducible promoter in the pEC-XT99A vector. Using fluorescence, the activity of the reporter gene in response to induced sigma...

Cílem této diplomové práce bylo identifikovat potenciální promotory genů kódujících faktory sigma u patogenních korynebakterií s využitím modelové bakterie Corynebacterium glutamicum a posoudit vliv sekvence aminokyselin proteinů sigma na rozpoznání promotoru. Faktory sigma jsou nezbytné pro transkripci a regulaci genové exprese a hrají klíčovou roli při řízení aktivity promotorů. Pochopení regulace genů kódujících faktory sigma je zásadní, protože přispívají k virulenci a patogenitě a regulují obrannou reakci proti imunitnímu systému hostitele. V této práci se analyzovaly promotorové oblasti genů kódujících faktory sigma u bakterií Corynebacterium ulcerans a Corynebacterium diphtheriae. Nejprve byly identifikovány potenciální sekvence promotorů v genomech C. ulcerans a C. diphtheriae na základě znalosti konvenčních sekvencí potvrzených promotorů v modelovém organismu. Vyhodnocení aktivity navržených promotorových oblastí sloužil odzkoušený dvouplazmidový systém vytvořený v C. glutamicum. Do vektoru pEPR1 byla vložena potenciální promotorová oblast před reportérový gen gfpuv a do vektoru pEC-XT99A byly před inducibilní promotor vloženy geny faktorů sigma. S využitím fluorescence se měřila aktivita reportérového genu v reakci na indukovaný faktor sigma z C. glutamicum, C. ulcerans nebo C....