Role jaderných laminů a Nup358 v infekci polyomavirem BK

Abstract

BK polyomavirus (BKPyV) has been causing serious health complication for several decades, especially in immunocompromised patients. The aim of this work was to investigate the progress of BKPyV replication during infection of human cells, as well as the influence of BKPyV infection on the nuclear lamina and nuclear pore proteins (NPC; Nuclear Pore Complex). During characterization and comparison of BKPyV infection in RPTEC/hTERT1 and MRC-5 cells we showed that BKPyV replicates better in RPTEC/hTERT1 cells as the productive infection results in six times higher viral titer. Using confocal microscopy we did not observe any nuclear lamina disruption nor VP1 accumulation under nuclear lamina that was previuosly observed in mouse polyomavirus infection. We verified previous observations of cytoplasmic deposits of NPC colocalizing with VP1 protein 24 hours post infection (hpi) with BKPyV and we showed that Nup358, protein of NPC, is a component of NPC deposits colocalizing with VP1. Neither transient expression from vectors encoding late region of BKPyV genome (pEF- BKV-late) or VP1 alone (pIaW), nor LT antigen expression analysis did not suggest any conection of observed phenomena to the productive infection. However, pseudoinfection of RPTEC/hTERT1 cells with VLPs derived from BKPyV induced VP1...

Lidský polyomavirus BK (BKPyV) již dlouhá desetiletí způsobuje závažné zdravotní komplikace zejména imunokompromitovaným jedincům. Cílem této práce se bylo zaměřit jednak na průběh infekce BKPyV v lidských buňkách, tak také na vliv BK virové infekce na jadernou laminu a proteiny jaderného póru (NPC; Nuclear Pore Complex). Při charakterizaci a porovnání infekce BKPyV v buňkách RPTEC/hTERT1 a MRC- 5 jsme ukázali, že replikace BKPyV probíhá lépe a dosahuje 6x vyššího virového titru v buňkách RPTEC/hTERT1. Při použití konfokální mikroskopie jsme v průběhu infekce BKPyV nepozorovali tvorbu narušení jaderné laminy, ani akumulaci proteinu VP1 pod jadernou laminou, jak bylo dříve pozorováno při infekci myším polyomavirem. Ověřili jsme předešlé pozorování cytoplazmatických deposit NPC, které se vyskytovaly v kolokalizaci s proteinem VP1 24 hodin po infekci (hpi) BKPyV a ukázali, že složkou těchto deposit vyskytujících se v kolokalizaci s VP1 je Nup358, protein NPC. Transientní exprese vektorů kódujících pozdní oblast genomu BKPyV (pEF- BKV-late) či samotný protein VP1 (pIaW) ani analýza exprese LT antigenu nenaznačily, že by se jednalo o jev způsobený produktivní infekcí. Pseudoinfekce buněk RPTEC/hTERT1 VLP odvozenými z BKPyV naopak indukovala tvorbu cytoplazmatických shluků VP1, v 33 % případů i...