Intermediate filament proteins of Preaxostyla flagellates

Abstract

5 Abstract Monocercomonoides exilis and Paratrimastix pyriformis are protists from within the group Preaxostyla (Metamonada), they possess an excavate morphology that is presumed to be an ancestral cytoskeletal organisation of eukaryotic cells. A significant part of eukaryotic but specifically excavate morphology is fibers composed of unidentified proteins. The hypothesis on which this thesis builds upon is that these fibers are composed of Intermediate Filament proteins (IF proteins). IF proteins are a polyphyletic group of proteins involved in the assembly of mechano-elastically important fibers in eukaryotes. The most widespread group of these proteins is a family called SF-assemblins, homologues of which were identified first in Chlamydomonas reinhardii, and giardins a protein family first discovered in Giardia intestinalis, which were also found to be related to this group. Nested into the bigger hypothesis is an idea, that SF-assemblins are present in M. exilis and P. pyriformis, further strengthening their position as a universally present eukaryotic feature. The goal of this work was to find support for the morphological hypothesis that LECA possessed an excavate morphology in protein composition of the cytoskeleton. Two approaches were employed. First, identifying proteins in cytoskeletal fraction...

6 Abstrakt Monocercomonoides exilis a Paratrimastix pyriformis jsou protista ze skupiny Preaxostyla (Excavata), mají exkavátní morfologii, která se považuje za ancestrální formu cytoskeletální organizace eukaryotických buněk. Podstatnou částí této morfologie jsou vlákna složená z dosud neidentifikovaných proteinů. Tato práce staví na teorii, že tyto vlákna jsou složena z proteinů Intermediárních filament (IF proteinů). IF proteiny jsou polyfyletická skupina proteinů, která se podílí na tvorbě mechano-elasticky významných vláken v eukaryotických buňkách. Nejvíce rozšířenou skupinou těchto proteinů jsou SF-assembliny, homology těchto proteinů byly poprvé popsány u druhu Chlamydomonas reinhardii, giardiny, proteinová rodina poprvé popsaná u Giardia intestinalis, jsou také příbuzné s těmito proteiny. Identifikace SF-assemblinů e u M. exilis a P. pyriformis by dále upevnila pozici SF-assemblinů jako obecně přítomného proteinu v eukaryotickém cytoskeletu. Cílem této práce bylo studovat proteiny přítomné v cytoskeletu exkavát dvěma způsoby. Zaprvé identifikovat proteiny v obohacené cytoskeletální frakci získané z kultur M. exilis a P. pyriformis. Zadruhé, lokalizovat SF-assembliny v obou protistech pomocí protilátek a expanzní mikroskopie. Protokol pro expanzní mikroskopii byl optimalizován pro oba organismy. V...