Study of bilirubin and its oxidation products

Abstract

Fototerapie (PT) modrozeleným světlem (420-490 nm) se řadí mezi standardní léčbu těžké novorozenecké žloutenky, která brání toxickému působení bilirubinu (BR) u kojenců. Vystavením se modrozelenému světlu je BR přeměněn na polárnější fotoizomer (PI) lumirubin (LR) a další oxidační produkty (mono-, di-, tripyrroly), které lze snadněji vyloučit z těla močí a/nebo žlučí. Ačkoli je PT považována za bezpečnou, je doprovázena zvýšeným rizikem různých patofyziologických stavů (zánětlivých procesů, alergií, cukrovky i některých typů rakoviny), zejména u novorozenců s extrémně nízkou porodní hmotností. Účelem této práce bylo pochopení mechanizmu vylučování BR v různých tkáních i buněčných liniích a zkoumání bioaktivních vlastností BR i jeho hlavního fotooxidačního produktu LR. Nejprve jsme se zaměřili na detekci BR v žluči a stolici hyperbilirubinemických potkanů Gunn. Současně jsme testovali antioxidační a prooxidační účinky nekonjugovaného BR u lidských hepatoblastomových (HepG2), proximálních tubulárních (HK2), neuroblastomových (SH-SY5Y) a myších endotelových (H5V) buněk, jejich vystavením postupně se zvyšujícím koncentracím BR. Pro porovnání účinků BR a LR na markery metabolismu a oxidačního stresu byly biologické aktivity zkoumány in vitro na buňkách lidského hepatoblastomu (HepG2), fibroblastu (MRC5)...

Phototherapy (PT) with blue-green light (420-490 nm) is the standard treatment for severe neonatal jaundice to prevent infants from toxic bilirubin (BR). Upon blue-green light exposure, BR is converted to more polar photoisomer (PI) lumirubin (LR) and the other oxidation products (mono-, di-, tripyrrols) which can be more easily disposed of the body via urine and/or bile. Although generally considered to be safe, PT is accompanied by an increased risk of various pathophysiological conditions (inflammatory processes, allergies, diabetes, and some types of cancer), in extremely low-birth-weight newborns. Thus, to account for these consequences, our study aimed to understand the mechanism of BR secretion in different tissues and cell lines and investigate the bioactive properties of BR and its main photooxidation product LR. At first, we focused on the detection of BR in the bile and feces of hyperbilirubinemic Gunn rats. Simultaneously, we tested the antioxidant and pro-oxidant effects of unconjugated BR in human hepatoblastoma (HepG2), proximal tubular (HK2), neuroblastoma (SH-SY5Y), and murine endothelial (H5V) cells by exposing them to progressively increasing concentrations of BR. To compare the BR and LR effects on metabolic and oxidative stress markers, the biological activities were...