Studium slepičích protilátek proti S proteinu viru SARS-CoV-2

Abstract

In the beginning of the year 2020, the WHO declared a pandemic in relation with spreading of a new infection. The Covid-19 disease is mainly manifested by respiratory problems caused by the SARS-CoV-2 virus. It enters the host cell through the ACE2 receptor, to which it is bound by the RBD domain of the surface "spike" protein. A possible way of protection against viral infection is vaccination, e.g. with an mRNA vaccine, which induces the production of a "spike" protein to invoke an immune response and antibody production. Another possible alternative for protection is passive immunotherapy. In this thesis, antibodies from chicken eggs were chosen, which are extensively used in the prevention of various viral and bacterial diseases. They are characterized by high binding affinity to antigens, they are economically inexpensive and are considered a rapid, simple and safe method of passive protection. Antibodies IgY were prepared from egg yolks of chickens vaccinated with an mRNA vaccine encoding a "spike" protein. The reactivity of the prepared antibodies with the whole "spike" protein (expressed in insect cells) was tested by ELISA, demonstrating the ability of the antibodies to bind to the antigen with high affinity. Subsequently, their ability to interact with the RBD domain itself (expressed in...

Začátkem roku 2020 světová zdravotnická organizace WHO vyhlásila pandemii v souvislosti šíření nové nákazy. Nemoc Covid-19 se projevuje především respiračními problémy způsobenými virem SARS-CoV-2. Do hostitelské buňky vstupuje přes receptor ACE2, na který se váže RBD doménou povrchového "spike" proteinu. Možným způsobem, jak se před virovou infekcí bránit, je očkování např. mRNA vakcínou, čímž je navozena produkce "spike" proteinu k vyvolání imunitní odpovědi a produkci protilátek. Další možnou alternativou ochrany je pasivní imunoterapie. V této práci byly zvoleny protilátky ze slepičích vajec, které mají široké využití v prevenci různých virových a bakteriálních onemocnění. Vyznačují se velkou vazebnou afinitou k antigenům, jsou ekonomicky nenáročné a jsou považovány za rychlý, jednoduchý a bezpečný způsob pasivní ochrany. Z vaječných žloutků slepic vakcinovaných mRNA vakcínou kódující "spike" protein byly připraveny protilátky IgY. Pomocí ELISA byla testována reaktivita připravených protilátek s celým "spike" proteinem (exprimovaný v hmyzích buňkách), kde byla prokázána schopnost protilátek se vázat na antigen s vysokou afinitou. Následně byla ověřována jejich schopnost interakce se samotnou RBD doménou (exprimovaná v E. coli). Technikou ELISA byla prokázána jen malá reaktivita protilátek...