Charakterizace a využití proteas štěpících za prolinem.

Abstract

Peptide bond formed by proline is resistant to most known proteases, therefore the discovery and isolation of proteases cleaving after this amino acid opens up new possibilities not only for protein characterization but also for industrial, food or pharmaceutical aplications. Aspergillus niger prolyl endopeptidase (AnPEP) is a proline-selective protease that is commercially available in a variety of products. In this bachelor thesis cleavage preferences of proteases AnPEP (Clarity Ferm) and ProAlanase (Promega) were characterized and compared. The effect of different conditions on the specificity of proteases, while cleavaging the mixture of model proteins was examined within this work. AnPEP cleavage preferences were characterized on complex protein mixtures and its immobilized form was tested as well. [IN CZECH] Keywords: ProAlanase, AnPEP, H/D exchange, structural proteomics, imobilized proteases [IN CZECH]

Peptidová vazba tvořená prolinem je vůči většině známých proteas odolná, proto objev a izolace proteas štěpících za touto aminokyselinou otvírá nové možnosti nejen pro studium proteinů, ale také pro průmyslové, potravinářské či farmaceutické použití. Prolylendopeptidasa z houby Aspergillus niger (AnPEP) je enzym specificky štěpící za prolinem, který je komerčně dostupný v podobě různých produktů. Tato bakalářská práce se zabývá charakterizací a srovnáním štěpných preferencí proteas AnPEP (Clarity Ferm) a ProAlanasa (Promega). V práci je popsán vliv různých podmínek na specifitu proteas při štěpení modelových proteinů. Štěpné preference AnPEPu byly charakterizovány i na komplexních proteinových směsích a byla také připravena a testována imobilizovaná forma enzymu. Klíčová slova: ProAlanasa, AnPEP, H/D výměna, strukturní proteomika, imobilizované proteasy