Vývoj HPLC-MS/MS metody pro stanovení L-dopa v lidském krevním séru

Abstract

The diploma thesis is focused on the development of a high-performance liquid chromatography in conjunction with tandem mass spectrometry detection (HPLC-MS/MS) for the determination of L-dopa in human blood serum. Levodopa is a dopamine precursor and is generally used to treat Parkinson's syndrome. The tandem mass spectrometry detection and the high-performance liquid chromatography method were optimized. The optimal conditions were as follows: HALO 90 Å Penta-HILIC column (150 x 2,1 mm; 2,7 µm), Advanced Materials Technology (USA). The mobile phase used was a mixture composed of 0,1% formic acid (component A) and acetonitrile (component B) under gradient elution. The total analysis time was 12,50 minutes, the flow rate was 0,4 ml min-1, a 5 µl sample was injected, the autosampler temperature was 15 řC and the column temperature was 40 řC. The following MRM transitions in positive mode were monitored: 1. levodopa: m/z 198,1 → m/z 152,1 (Q1: -10 V, CE: -16 V, Q3: -28 V) 2. deuterated levodopa (IS): m/z 201,1 → m/z 155,2 (Q1: -10 V, CE: -14 V, Q3: -28 V) The setting of the ion source was as follows: the nebulization gas flow 3 l min-1, the drying gas flow 10 l min-1, the internal temperature 300 řC, the capillary voltage 3 000 V, the desolvation capillary temperature 250 řC. In the end of the work,...

Tato diplomová práce se zabývá vývojem metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní tandemovou detekcí (HPLC-MS/MS) pro stanovení L-dopy v lidském krevním séru. Levodopa je prekurzor dopaminu a používá se obecně pro léčbu Parkinsonského syndromu. V rámci diplomové práce byla provedena optimalizace tandemové hmotnostní detekce a optimalizace vysokoúčinné kapalinové chromatografie. Nalezené optimální parametry jsou následující: chromatografická kolona HALO 90 Å Penta-HILIC (150 x 2,1 mm; 2,7 µm), Advanced Materials Technology (USA). Použitá mobilní fáze byla směs složená z 0,1% kyseliny mravenčí (složka A) a z acetonitrilu (složka B) za gradientové eluce. Celková doba analýzy byla 12,50 minut, průtok MF byl 0,4 ml min-1, nastřikován byl vzorek o objemu 5 µl, teplota na dávkovači byla 15 řC a teplota kolony byla 30 řC. V diplomové práci byly sledovány následující MRM přechody v pozitivním módu: 1. levodopa: m/z 198,1 → m/z 152,1 (Q1: -10 V, CE: -16 V, Q3: -28 V) 2. deuterovaná levodopa (IS): m/z 201,1 → m/z 155,2 (Q1: -10 V, CE: -14 V, Q3: -28 V) Iontový zdroj byl nastaven následovně: průtok nebulizačního plynu 3 l min˗1, průtok sušícího plynu 10 l min˗1, teplota vnitřního prostoru 300 řC, napětí na kapiláře 3 000 V, teplota desolvatační kapiláry 250 řC. V závěru práce byla...